“生物农药”来袭
时间：2021-02-08 00:06:35 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
水稻纹枯病是南方水稻病害之首。目前以化学农药为主的防治手段普遍存在抗药性、农药残留等问题，严重影响了当地土壤微生物群落的多样性，不利于农业的可持续发展。
湖南湘潭县中路铺镇凤形山属丘陵地带，四季分明，雨量丰沛，空气质量好。我们从山坡土壤中分离鉴定了四株芽孢杆菌：短小芽孢杆菌ZN-2、海洋芽孢杆菌ZN-3、甲基营养型芽孢杆菌ZN-4、蜡样芽孢杆菌ZN-6。
当地村民往往是一季水稻一季油菜轮种，可利用四株芽孢杆菌对水稻纹枯病和油菜菌核病做生防试验，筛选对有机水稻进行生物防治高效、无副作用的有益微生物，为有机农产品生产和环境及食品安全奠定基础。
一、凤形山有益微生物对水稻纹枯病的抑菌活性
1.供试菌种
生防菌株：短小芽孢杆菌ZN-2、海洋芽孢杆菌ZN-3、甲基营养型芽孢杆菌ZN-4、蜡样芽胞杆菌ZN-6。
致病真菌：水稻纹枯病菌、油菜菌核病菌（立枯丝核菌）。
2.试验步骤
将四种活化36h的生防菌分别接种到LB液体培养基中，在28 ℃、180r/min下摇培36h，至菌悬液终浓度达到1.0×109 CFU·mL-1，即为四种生防菌发酵液制剂。所得四种培养液分别在12 000rmp离心20min，取上清液进一步过滤获得四种无菌提取液制剂。
将水稻纹枯病和油菜菌核病菌接种到PDA平板上，置于25℃培养箱中培养。将培养好的病原真菌菌碟0.5 mm置于平板中央，在与平板中央和平板边缘等距离位置放置5mm直径滤纸，承载菌悬液并防止其流散。然后在滤纸上滴加150μL制备好的生防菌悬液，以添加无菌水作为对照组。接种后的平板置于28 ℃培养箱中培养，当对照平板中菌丝长满平板时测量抑菌圈直径。
3.试验结果
结果显示，甲基营养型芽孢杆菌ZN-4对油菜菌核病菌有显著的抑菌活性，ZN-2、ZN-3、ZN-6对油菜菌核病菌均无明显的抑制效果。
而短小芽孢杆菌ZN-2对水稻纹枯病菌有显著的抑制作用，ZN-3、ZN-4、ZN-6对水稻纹枯病菌均无明显的抑制效果。
二、ZN-2与ZN-4混合无菌提取液对水稻纹枯病的抑制活性
1.制备防治制剂
将活化好的ZN-2与ZN-4接种于LB液体培养基中，在37℃下振荡培养24h 至48h。待菌细胞浓度均达107cfu/mL以上，以等体积比例混合配成培养液，即为混合菌发酵液制剂。
所得培养液在12 000rmp离心20min，取上清液进一步用滤器过滤（滤膜孔径为0.22um）获得无菌提取液制剂。
2.混合菌发酵液制剂对水稻纹枯病的抗菌活性检测
在PDA平板中间接入培养3天至5天的直径为5mm植物病原真菌水稻纹枯病菌碟，28℃恒溫培养。36h后，将混合菌液分别接种在距离真菌菌落中央2cm处，使其成为菌落。继续培养，定期检查抑制效果。
3.无菌提取液制剂对水稻纹枯病的抗菌活性检测
在PDA平板上对称打4个直径为5mm的孔洞，其中两个孔滴入20uL混合菌过滤液，另外两个孔滴入200uL无菌水作对照。在培养基上铺一层无菌玻璃纸，以防止其挥发。在平板中央移入水稻纹枯病菌碟，28℃下培养，观察有无抑菌圈产生。
4.不同浓度无菌提取液制剂对水稻纹枯病菌的影响
将混合菌无菌提取液二倍稀释液按1%、2%、4%、8%、16%浓度混匀至溶化的PDA培养基中，制备平板，以加等体积的无菌水处理为对照，每种处理重复三次。晾干后在平板上铺一层灭菌玻璃纸，并在平板中央接种5mm水稻纹枯病菌碟，25℃恒温培养。待对照平板长满菌丝后，测量菌落直径，计算抑菌率。
试验表明，无菌提取液对水稻纹枯病菌丝生长具有显著的抑制作用。从菌落直径来看，当添加浓度达到8%时，抑制率达到50%以上；当添加浓度为2%时，对病菌生长有一定的抑制作用，但已明显下降。
三、总结
综上所述，短小芽孢杆菌ZN-2及其与甲基营养型芽孢杆菌ZN-4的混合无菌提取液能有效防治有机水稻纹枯病，有作为生物农药的良好潜力。但如何保证短小芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌及其混合无菌提取液在田间试验中的稳定性，还需要进一步研究。（指导老师：蒋银生段家铁）
