【不同提取工艺下甘草提取物中甘草酸铵含量测定研究】复方甘草酸铵是什么药
时间：2020-03-19 07:43:29 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
[摘要] 目的：建立甘草提取物中甘草酸铵的含量测定方法，优选甘草酸铵的提取工艺。方法：以甘草酸铵为指标，采用高效液相色谱法测定甘草酸铵含量；比较煎煮法、水提醇沉法、0.5%氨水提取与70%乙醇超声法等工艺的差异。结果：0.5%氨水提取甘草酸铵含量较高，甘草酸铵含量在5.267 5～337.12 μg范围里呈较好的线性关系；甘草酸铵的回收率为98.51%。结论：0.5%氨水提取工艺所得甘草提取物中甘草酸铵含量较高，甘草酸铵转移率最高，提取方法合理、可行、效率高。
[关键词] 甘草提取物；甘草酸铵；提取工艺；高效液相色谱法
[中图分类号] R931 [文献标识码] C [文章编号] 1674-4721（2011）11（c）-047-03
Study on content determination of Monoammonium Glycyrrhizinate in the distilled licorice by different extraction technique
HUANG Huilian, ZHOU Yanshuang, SONG Lili
Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited, Guangdong Province, Guangzhou 510450, China
[Abstract] Objective: To establish a method for content determination of Monoammonium Glycyrrhizinate in the distilled licorice and to optimize the extraction technique. Methods: Taking Monoammonium Glycyrrhizinate as index, we used the technique of HPLC to determine its content. Then compared the difference among water-decocting water-extracting and alcohol-depositing; 0.5% ammonia-extracting and 70% alcohol ultrasonic-method. Results: The content from 0.5% ammonia-extracting extraction of Monoammonium Glycyrrhizinate was the higher. In the range of 5.267 5-337.12 μg, the Monoammonium Glycyrrhizinate showed good linear relationship. The recovery of Monoammonium Glycyrrhizinate was 98.51%. Conclusion: The content from 0.5% ammonia-extracting extraction of Monoammonium Glycyrrhizinate is the higher. The transfer rate of Monoammonium Glycyrrhizinate is the highest. The 0.5% ammonia-extracting is reasonable, feasible and efficient.
[Key words] The distilled licorice; Monoammonium Glycyrrhizinate; Extraction technique; HPLC
甘草为豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）、胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L）的干燥根及根茎。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的作用。主要用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性[1]。在中成药生产中，常以甘草的提取物入药。其主要活性成分为甘草酸铵（glycyrrhizic acid，GA），对许多疾病有预防和治疗作用。甘草酸铵也是甘草甜味的有效成分，它的特点是高甜度、低热能、安全无毒，起泡性和溶血性作用低。能与多种生物碱、抗生素、氨基酸等生成复盐或复方制剂，具有协同、增溶、增加药物稳定性、提高生物利用率及降低毒副作用的功效。同时，还广泛用于食品添加剂、化妆品、烟草行业[2]。我公司小儿七星茶颗粒成方制法中的甘草也是以提取物入药，它的提取工艺与纯化方法直接影响该产品的质量及溶化性。因此，研究甘草提取物的提取工艺及纯化方法具有重要意义。本实验通过优选甘草的提取工艺，来达到提取控制甘草提取物的质量与纯度。该方法的样品提取简单、实验结果准确。
1 仪器与试剂
Agilent 1100 型高效液相色谱仪，Diamonsil（钻石）-C18 ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；DAD检测器，KQ-500DE型超声波清洗器，Sartorius-CPA225D型号的电子天平。乙腈为色谱纯（Merck KGaA）；水为纯化水；醋酸为分析纯（广州化学试剂厂）。甘草酸铵对照品（中国药品生物检定所，批号为110731-200615），甘草药材，甘草提取物（广州王老吉药业股份有限公司提供）。
2 提取工艺
2.1 煎煮法
提取工艺为：取甘草药材粗粉1 000 g，加入水煎煮2次，每次2 h，滤过，合并滤液，浓缩至适量；得提取物总量以干燥品计：104 g。
2.2 水提醇沉法
提取工艺为：取与“2.1法”下的同一批号甘草药材粗粉1 000 g，加水煎煮2次，每次2 h，滤过，合并滤液，浓缩至比重为1.1，加乙醇使含醇量为60%，静置过夜，取上清液过滤，滤液浓缩成浸膏。得提取物总量以干燥品计：57 g。
2.3 氨水提取法
提取工艺为：取与“2.1法”下的同一批号甘草药材粗粉1 000 g，加入0.5%的氨水为提取溶液，煎煮2次，每次2 h，滤过，合并滤液，浓缩至适量；得提取物总量以干燥品计：107 g。
2.4 超声提取法
提取工艺为：取与“2.1法”下的同一批号甘草药材粗粉1 000 g，加入70%乙醇超声处理2次，每次60 min，滤过，合并滤液，浓缩至适量；得提取物总量以干燥品计：84 g。
3 方法与结果
3.1 测定波长
采用Agilent1100高效液相色谱仪的DAD检测器，使甘草酸铵对照品溶液在200～400 nm波长范围内采用光谱扫描，结果250 nm处有最大吸收波长，故选定250 nm为最佳检测波长。结果见图1。
图1 甘草酸铵光谱图
3.2 色谱条件
以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%醋酸（20∶80）为流动相，检测波长为250 nm，柱温40℃。理论板数应不低于3 000，按甘草酸铵峰计算。
3.3 溶液配制
3.3.1 对照品溶液的配制：取甘草酸铵对照品适量，加流动相制成每1 ml含40 μg的溶液，即得。
3.3.2 供试品溶液的制备：取甘草提取物0.1 g，精密称定，置10 ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，再取1 ml至10 ml的量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。
3.3.3 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪中，测定并计算结果。
3.4 专属性考察
根据以上色谱条件下，将分别将甘草酸铵对照品溶液、供试品溶液、注入液相色谱仪中，得色谱图，结果可见甘草酸铵对照品出峰保留时间与供试品中甘草酸铵出峰保留时间基本一致，并且无其他杂质峰干扰。结果见图2。
图2 从上至下：甘草酸铵对照品、供试品色谱图
3.5 线性关系考察
取甘草酸铵对照品适量。分别配制成每1 ml为5.267 5、10.535、21.07、42.14、84.28、168.56、337.12 μg，进样量为10 μl，测定各峰面积。计算得回归方程：甘草酸铵：Y=7.714 2X+4.117 8，r=0.999 8。甘草酸铵浓度在5.267 5～337.12 μg/ml之间时与峰面积呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，得出峰面积值，计算甘草酸铵的峰面积分值RSD为0.15%。结果说明精密度良好。
3.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，在0、2、4、6、12、24 h内，分别进样10 μl，得出峰面积值，计算得甘草酸铵含量的RSD为1.80%。结果说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
3.8 重复性试验
精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份，测定，并计算出甘草酸铵含量，得RSD为1.90%。结果说明重复性良好。
3.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的甘草提取物样品适量，共取9份，置100 ml容量瓶中，分别精密加入低、中、高三个不同浓度的甘草酸铵对照品溶液，按所定方法测定，并计算回收率[3]，结果见表1。
表1 甘草酸铵加样回收率试验测定结果
3.10 样品测定
分别精密称取不同提取工艺下的甘草提取物，测定含量，计算。结果见表2。
表2 样品测定结果
3.11 采用不同的提取工艺的含量与转移率
原药材中甘草酸铵的含量为2.5%，采用不同的提取工艺所制的甘草提取物及甘草酸铵的含量、转移率。见表3。
4 讨论
以上结果显示氨水提取工艺的甘草酸铵的转移率最高，甘草酸铵含量较高，提取物具有持久的特殊甜味；超声提取法甘草酸铵的转移率较高，甘草酸铵含量最高，提取物具有特殊的豆腥味；煎煮法甘草酸铵的转移率较低，甘草酸铵含量最低，提取物有微弱的特殊臭气和持久的特殊甜味；水提醇沉法甘草酸铵的转移率最低，甘草酸铵含量较低，所提取物品细腻，溶于水中无杂质，并具有持久的特殊甜味。总之，不同的提取方法所得的相应指标各不同，但可针对不同的成方制剂，优选不同的提取方法，来达到控制甘草提取物的质量与纯度。保证产品的质量[4-8]。
实验数据表示，采用高效液相色谱法检测甘草酸铵，回收率、稳定性及重现性良好，结果准确可靠，可提供各成方制剂中甘草提取物的质量控制和分析。
[参考文献]
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[2] 范彩玲,张海燕,周映霞,等.甘草中甘草酸提取方法的比较[J].河南科学,2010,28(12):1543-1545.
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[4] 林勇杰.HPLC测定小儿止咳糖浆中甘草酸铵的含量[J].海峡药学,2008, 20(7):86-88.
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[7] 张安元,刘兵,吴锐,等.HPLC法测定复方甘草酸苷片中甘草酸单铵的含量[J].安徽医药,2008,12(11):1038-1039.
[8] 宋振民,梁永广,张文周.复方甘草酸苷(美能)治疗活动性肝炎肝硬化的疗效观察[J].中国现代中药,2006,8(1):22-24.
（收稿日期：2011-08-29）
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