手足口病患儿免疫学指标变化的临床意义
时间：2023-06-15 11:15:15 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
白 杨，梁 轩，杜雷雷，高艺欣，李先先，穆明东，何进伟
(延安大学医学院 基础医学学院，陕西 延安 716000)
手足口病(hand,foot and mouth disease，HFMD)是由小核糖核酸病毒科病毒引起的一种病毒性疾病，5岁以下儿童多见，传染性强[1]，初始表现为发热和不适，1～2 d后手、脚及唇可出现扁平变色斑点或肿块，可发展为水泡，臀部及腹股沟偶见。症状和体征一般在感染病毒后3～6 d出现，多数患儿1星期后自愈，少数可出现并发症，如心肌炎、无菌性脑膜脑炎等。机体体液与细胞免疫功能对HFMD病情发展和转归具有重要作用，并对指导治疗和判断预后有一定意义[2]。我们探讨了HFMD患儿体液与细胞免疫指标改变的临床意义，以期为临床判断病情及采取干预措施提供依据。
1.1 一般资料
选取2019-10—2021-01月延安大学附属医院儿科收治的80例HFMD患儿，其中男43例，女37例；
年龄4～18月，平均12.6月。均符合中华人民共和国卫健委《手足口病诊疗指南(2018年版)》[3]相关诊断标准，并依据标准分为轻型组38例和重症组42例。选取同年龄段正常儿童40例为对照组。3组儿童性别、年龄等一般情况资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
本研究经延安大学医学伦理委员会审核批准，研究内容患儿家属均知情同意并签署知情同意书。
1.2 标本收集
抗凝管采集空腹外周静脉血2～3 mL待测。采集空腹外周静脉血2～3 mL室温静置1 h凝固后，3 000 r·min-1离心10 min，分离血清置-80 ℃保存待测。
1.3 免疫学指标检测
细胞免疫学指标检测：流式细胞仪(FACS Calibur，美国BD公司)检测外周静脉血T淋巴细胞亚群，荧光标记抗体试剂亦购自BD公司。取50 μL外周血标本与相应于各T细胞亚群荧光单克隆抗体10 μL充分混匀，室温下避光孵育15 min，加入250 μL溶血素充分混匀，置37 ℃水浴15 min，加入PBS缓冲液250 μL，振荡混匀，37 ℃水浴孵育15 min，加入PBS缓冲液1 mL，振荡混匀，1 800 r·min-1室温离心5 min，弃上清液，加入PBS缓冲液250 μL，振荡混匀，上流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞亚群。
体液免疫学指标检测：应用全自动生化分析仪(贝克曼AU2700，美国贝克曼库尔特有限公司)行散射比浊法检测血清免疫球蛋白(IgG 、IgA 和IgM)及C3和C4；
应用伯乐酶标仪(BIO-RAD，美国伯乐公司)行酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清炎症细胞因子IL-1、IL-6、INF和TNF-α。检测试剂分别购自德国罗氏诊断有限公司和北京万泰生物药业股份有限公司。按照相关使用说明操作。
1.4 统计学方法
2.1 细胞免疫指标变化比较
正常对照组儿童外周血T淋巴细胞亚群(CD3+，CD4+，CD8+)检测值及CD4+/CD8+比值与正常参考值基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。HFMD轻型组和重症组患儿外周血T淋巴细胞亚群检测值均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，重症组比轻型组下降更为明显(P<0.05)；
轻型组和重症组外周血CD4+/CD8+淋巴细胞亚群比值亦比对照组有所下降，但差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。
表1 对照组儿童外周血T淋巴细胞亚群检测值
表2 外周血T淋巴细胞亚群水平比较
2.2 体液免疫指标变化比较
HFMD患儿血清免疫球蛋白IgG、IgA和IgM水平均高于对照组且随病情加重而升高，差异有统计学意义(P<0.01)；
血清C3和C4含量低于对照组且随病情加重下降，差异有统计学意义(P<0.01)(表3)。
表3 血清免疫球蛋白水平及补体含量比较
2.3 血清炎症细胞因子水平变化比较
HFMD患儿血清炎症细胞因子IL1、IL6和TNFα水平均较对照组升高且随病情加重进一步升高，差异有统计学意义(P<0.01)；
INF水平较对照组降低且随病情加重进一步下降，差异有统计学意义(P<0.01)(表4)。
表4 血清炎症细胞因子水平比较
HFMD传染性极强，起病急、发展快，于1957年在新西兰首次报道，东南亚发生过几次大暴发流行。小核糖核酸病毒科多种肠道病毒特别是肠道病毒71型和柯萨奇病毒是引起儿童HFMD的常见病原体[1]。临床表现常见发热、四肢末端及口腔等部位斑丘疹和疱疹，病情一般持续1周后痊愈，亦可能发展形成重症。重症晚期可能出现心肺和神经系统并发症[4]，部分患者会留下后遗症，严重者可能导致死亡[5]。在我国，2008年局部地区首次发生肠道病毒71型引起的HFMD暴发；
2012年由柯萨奇病毒引起的HFMD暴发疫情数增高，可能与部分地区柯萨奇病毒A6型发生变异使易感人群增加有关；
2016年出现HFMD流行小高峰[6]；
2018-05月HFMD被我国纳入法定传染病管理[7]。
目前研究认为，细胞免疫和体液免疫均在HFMD病程进展中发挥重要作用[2,8]。由于幼儿免疫功能发育尚不健全，特异性及非特异性免疫功能均处于较低状态，易受病毒感染，在对抗病毒感染时CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞会被消耗，从而使细胞免疫功能更加降低，所以幼儿很易患HFMD；
而且低龄儿童感染HFMD后，重症或危重症发生率及病死率均相对较高[9]。T淋巴细胞主要为细胞免疫并辅助体液免疫和调节免疫应答，T淋巴细胞(CD3+)及其亚群(CD4+、CD8+)的相对比值可反映人体细胞免疫功能状态。CD3+细胞代表机体总T淋巴细胞，CD3+T淋巴细胞水平降低表明人体免疫功能状态低下。T淋巴细胞亚群执行不同的免疫功能，其中CD4+细胞为辅助性T细胞，可通过分泌细胞因子调节或辅助其他免疫细胞的活性；
CD8+细胞主要是细胞毒性T细胞，具有直接杀伤病毒感染的靶细胞的作用[10-12]。HFMD患儿CD4+细胞和CD8+细胞水平下降提示T淋巴细胞功能受损，患儿免疫系统紊乱严重[13]。B淋巴细胞亚群发挥体液免疫功能，活化的B细胞能够作为抗原呈递细胞向辅助性T细胞呈递抗原，活化后辅助性T细胞激活B淋巴细胞，使其转化为浆细胞而分泌抗体发挥体液免疫功能[10]。IgM抗体在机体特异性免疫防御中最先出现；
IgA抗体主要在黏膜局部发挥免疫作用，能够阻止病毒吸附细胞；
IgG抗体除具有中和病毒作用外还能间接杀伤病毒感染的细胞[11]。患儿发病时，机体体液免疫被激活，抵御病原体侵袭的能力降低，导致大量抗体产生。补体作为固有免疫机制在抗病毒感染中也发挥重要作用，机体中血清补体能够通过相关途径直接参与免疫应答，溶解免疫球蛋白复合物达到抗病毒的作用，同时还能直接中和、溶解病毒，HFMD患儿补体水平下降可能与其参与免疫应答后大量消耗有关[14]。多数免疫细胞通过分泌细胞因子发挥功能或调节机体其他细胞毒反应，细胞因子在介导炎症反应中发挥重要作用，细胞因子水平的改变可反应机体免疫或病理状态[15-16]。
多项研究表明，HFMD患儿体液免疫与细胞免疫功能下降与病情严重程度相关[17-20]，本研究结果表明，HFMD患儿外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+水平均低于正常儿童，重症组水平更低；
血清免疫球蛋白IgG、IgA和IgM水平均高于对照组且随病情加重进一步升高；
C3和C4含量却随病情加重而下降；
血清炎症细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α水平均比正常对照组升高并且随病情加重而升高，INF含量比正常对照组下降并随病情加重而下降更显著，可能因病情加重导致炎症反应加剧，机体免疫能力降低，血清补体消耗增加所致。
综上，HFMD患儿细胞免疫和体液免疫指标均较正常儿童有较大变化，且随病情进展变化幅度增大，可为临床判断病情严重程度及采取干预措施提供一定参考依据。
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