小儿过敏性紫癜性肾炎SOCS-3及HMGB1与Th17/Treg细胞失衡的关系
时间：2023-06-21 11:15:04 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
马志华，布力布丽·巴哈提，阿布来提·阿不都哈尔
(新疆医科大学第一附属医院小儿急危重症医学科，新疆 乌鲁木齐 830054)
过敏性紫癜性肾炎(henoch-schonlein purpura nephritis，HSPN)作为一种小儿免疫性血管炎，临床表现为血尿异常或者急性肾炎综合征、甚至出现肾功能衰竭，通常被学者认为与体液免疫、细胞免疫等存在联系[1]。T细胞亚群中的辅助性T细胞(helper T cell 17，Th17)细胞和调节性T细胞(regulate T cell，Treg)细胞分别发挥促进和抑制免疫炎症反应的作用，此2种相互拮抗的细胞比例失衡会导致多种疾病，也参与到了HSPN的病情进展过程中，且随着HSPN急性发展，Th17/Treg失衡越严重，因此探究患儿机体内与Th17/Treg失衡相关因素对改善预后有重要价值[2-3]。细胞因子信号转导抑制蛋白3(suppressor of cytokine signaling-3，SOCS-3)作为细胞因子诱导产生的信号通路中十分关键的负性调节蛋白，可通过抑制细胞因子的信号传导调节机体对细胞因子的过度刺激，而高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)作为晚期炎性介质的一种，能通过活化的免疫细胞主动分泌，使得受损的细胞被动释放至细胞外，随后迁移至炎症器官和组织与相应受体，均对患儿机体免疫反应产生重要作用，但目前临床对其与Th17/Treg表达相关性的研究较少[4-5]。本研探讨小儿过敏性紫癜性肾炎SOCS-3及HMGB1与Th17/Treg细胞失衡的关系，报告如下。
1.1一般资料 选取2018年1月—2020年1月本院收治的实行干预治疗的HSPN患儿100例为HSPN组，男性54例，女性46例；
年龄3～12岁，平均(7.12±1.07)岁；
另选取同时期过敏性紫癜患儿100例为对照组，男性52例，女性48例；
年龄3～12岁，平均(6.85±1.21)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
本研究经医院伦理委员会批准通过。所有患儿家属均知情同意且签署知情同意书。
1.2纳入标准 ①依据《紫癜性肾炎的诊治循证指南(试行)》[6]对HSPN的描述，过敏性紫癜病程6个月内，肉眼血尿或1周内3次镜下血尿红细胞≥3个/高倍视野，24 h尿蛋白定量>150 mg或尿蛋白/肌酐>0.2；
②学龄前期及学龄期，3～12岁；
③均为初诊，且既往无治疗史。
1.3排除标准 ①脑、心、肝功能经检查存在明显异常；
②入组前30 d 内采取其他方式进行过相关治疗；
③合并先天免疫缺陷、过敏性疾病或恶性肿瘤；
④合并其他原因引起的肾炎。
1.4方法 ①淋巴细胞检测：于2组入院用药前采集其空腹静脉血5 mL，分别加入3个无菌肝素抗凝管，血液采集均为无菌操作下完成，采集结束后立刻进行下一步处理，采用流式细胞法对血液中Th17比例及Treg进行检测；
仪器为美国BD公司生产的FACSCantoTMII流式细胞仪，试剂盒为配套。②HMGB1检测：取血液以1 500 r/min速度离心后采用酶联免疫吸附法对血清HMGB1水平进行检测，以标准品浓度作为横坐标，吸光度作为Y轴，画出能作为标准曲线的公式，根据标准方程进行计算；
仪器为Thermo公司生产的FC型酶标仪，试剂盒为配套。③SOCS3 mRNA检测：取剩余部分血液采用密度梯度离心法将其分离出外周血单个核细胞来检测SOCS3 mRNA表达，严格按照mRNA提取步骤将外周血单个细胞中的mRNA进行提取，然后将其逆转录为cDNA，在0.2 mL的EP管里进行逆转录反应，然后采用实时荧光聚合酶联定量分析法(polymerase chain reaction，PCR)对其表达进行检测，PCR反应条件为95 ℃持续1 min变性，再95 ℃持续10 s，58 ℃持续2 s，72 ℃持续20 s，共40个循环，将β-actin作为内参基因，SOCS3 mRNA表达水平为目的基因Ct值与内参基因β-actin Ct值的差异，为基因相对表达量，PCR仪器为杭州汉泽仪器有限公司提供的ABI Prism 7500型。
1.5观察指标 ①比较2组HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg检测结果，并计算Th17/Treg水平。②利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic，ROC)分析HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg、Th17/Treg预测HSPN发生的价值；
根据HSPN患儿各指标表达绘制曲线，计算每个测量指标的下曲线面积，下曲线面积>0.5即表示该指标具有诊断效能，越接近于1则表明其诊断效能越高；
该曲线上有一个截断点(横纵坐标之和的最大值)，截断点对应数值为该测量项目诊断阈值[7]。③通过Person系数分析HMGB1、SOCS3 mRNA与Th17、Treg、Th17/Treg的相关性。
1.6统计学方法 应用SPSS 22.0统计软件分析数据。计数资料比较采用χ2检验，计量资料比较采用t检验，利用ROC分析HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg、Th17/Treg预测HSPN发生的价值，相关性分析以Person系数检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2.12组细胞因子表达情况比较 HSPN组HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Th17/Treg高于对照组，Treg水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
表1 2组细胞因子表达情况比较Table 1 Comparison of cytokine expression between two groups
2.2各细胞因子预测患儿发生HSPN的ROC分析 经ROC分析，HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg、Th17/Treg预测患儿发生HSPN的曲线下面积分别为0.944、0.924、0.942、0.973、0.955，见表2，图1。
表2 各细胞因子预测患儿发生HSPN的ROC分析Table 2 ROC analysis of cytokines in predicting HSPN in children
图1 HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg、Th17/Treg预测患儿发生HSPN的ROC曲线
2.3HSPN患儿SOCS-3及HMGB1与Th17/Treg细胞失衡的相关性分析 HMGB1、SOCS3 mRNA与Th17、Th17/Treg呈明显正相关，与Treg呈明显负相关(P<0.05)。见表3。
表3 HSPN患儿SOCS-3及HMGB1与Th17/Treg细胞失衡的相关性分析Table 3 Correlation between SOCS-3, HMGB1 and Th17/Treg cell imbalance in children with HSPN
儿童HSPN主要发生于学龄前，以秋冬季节居多，其发病机制目前尚不完全清楚，但普遍认为可能是免疫蛋白介导的免疫复合物沉积在血管壁，引起免疫损伤而导致血管壁通透性增高，使得血液和淋巴液渗出，引起多部位病变[8]。目前研究认为HSPN患儿在急性期时可能存在免疫应答失衡，导致Th17细胞异常活化，调节性T细胞产生减少或者反应不足，从而诱导B细胞过度活化，免疫蛋白A合成异常增高，机体分泌过多的炎症细胞因子，导致炎症反应失控并引起自身免疫损伤[9]。
本研究结果显示，HSPN组HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Th17/Treg显著高于对照组，Treg水平显著低于对照组，提示HSPN患儿体内HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Th17/Treg、Treg均会呈现异常表达。HMGB1是广泛分布于哺乳动物体内的核内非组蛋白，在细胞核内结合DNA以稳定核小体、调节基因转录和DNA修复，在细胞膜上表达则能促进神经生长和血小板激活，放大炎性信号进而引起炎性反应失控，从而增加HSPN患儿临床症状[10]。SOCS 蛋白家族抑制细胞因子信号转导的机制有多种，不同的SOCS蛋白发挥负反馈的调节机制不同，SOCS3对调节T淋巴细胞发育、分化的作用最重要，主要通过抑制JAK络氨酸激酶的活性而发挥作用，抑制白介素12/STAT4信号通路，抑制Th1分化，促进Th2的分化，引起免疫损害进而促使患儿发病[11]。Th17细胞主要通过分泌细胞因子白细胞介素17、白细胞介素6、白细胞介素23等发挥促炎作用，诱导单核巨噬细胞产生的促炎因子和趋化因子表达招募和活化中性粒细胞，引起组织细胞浸润和破坏，从而促进HSPN的发生及发展[12]。Treg细胞具有免疫能力和免疫抑制，抑制由趋化因子和巨噬细胞炎症性蛋白质产生而活化的单核细胞，抑制中性粒细胞的募集和活化，分泌颗粒化的卟啉，诱导效应淋巴细胞凋亡，并抑制树突状细胞的缺乏，从而使得Th17增高，机体免疫失调，使得血管壁累积大量中性粒细胞，引起广泛血管炎，促进HSPN的发病[13]。
经ROC分析，HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg、Th17/Treg预测HSPN患儿的曲线下面积分别为0.944、0.924、0.942、0.973、0.955，提示HMGB1、SOCS3 mRNA、Th17、Treg、Th17/Treg均能对HSPN的发生作出一定预测。ROC曲线越是凸状，越接近左上，表示诊断值越大，曲线将敏感度和特异度以图示方法结合在一起，从而准确反映各指标特异度和敏感度的关系，且不固定分类界值，允许中间状态存在，帮助使用者结合专业知识来对漏判及误判可能性进行权衡，选择最佳截断值作为引起患儿发生HSPN的血清预测参考值[14]。
经相关性分析，HMGB1、SOCS3 mRNA与Th17、Th17/Treg呈明显正相关，与Treg呈明显负相关，经相关性分析，HMGB1、SOCS3 mRNA与Th17/Treg失衡存在明显相关性。Th17、Treg均为CD4+T细胞的重要亚型，两者分化紧密相关，在炎性环境下Treg能转化为Th17及其它效应T细胞，使得其失去免疫抑制功能，还可能受代谢作用调节，缺氧诱导因子1α能感受细胞的缺氧状态并上调糖酵解途径相关基因以支持Th17细胞的分化[15]。HMGB1可能通过直接作用于Th17细胞和 Treg细胞或经其他免疫细胞(树突状细胞和单核细胞)间接作用来调节Th17/Treg平衡[16]。周天等[17]的研究认为，HMGB1能刺激离体髓样树突状细胞产生白细胞介素23并促进淋巴细胞分泌白细胞介素17A，与本研究结果相符。SOCS3一方面可通过调节Th1细胞和Th2细胞可以共同抑制Th17的分化，另一方面通过抑制白细胞介素6和白细胞介素23介导的STAT3信号途径和白细胞介素4介导的STAT6途径负调控Th17的分化[18]。Th17细胞表达SOCS3，抑制Th17细胞的生成，形成负反馈通路，这可能是机体的一种保护性反射，避免了Th17细胞过多导致的过度炎症。
综上所述，HMGB1、SOCS3 mRNA与Th17、Th17/Treg呈明显正相关，与Treg呈明显负相关，其可能通过引起Th17/Treg失衡来影响HSPN患儿病情的进展，需引起临床医师密切关注。
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