微生物培养基_关于微生物检定法中培养基熔化问题的探讨
时间：2019-05-13 03:13:44 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
【中图分类号】R91 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)06－0260－01 【摘要】：本文针对微生物检定法中培养基熔化问题的研究，通过实验确定最好得熔化方法并得出结论。
【关键词】：微生物检定法 ；培养基；回收率；指示能力；抑制能力；促进生长能力。
前言：微生物检定法中培养基熔化问题是一个很关键的问题。如何才能让培养基熔化方法简单又少消耗资源还能符合培养基检定要求，是个关键问题。通过试验，得出了结论。在105度高压20分钟，完全可以达到要求。
一： 材料设备
1.仪器：立式蒸汽灭菌器；净化工作台；恒温干燥箱；生化培养箱；霉菌培养箱。
2.培养基：营养琼脂培养基；玫瑰红钠琼脂培养基；伊红美蓝琼脂培养基甘露醇氯化钠琼脂培养基；营养琼脂对照用培养基；玫瑰红钠琼脂对照用培养基；伊红美蓝琼脂对照用培养基；甘露醇氯化钠琼脂对照用培养基。均由中国药品检验检定所购进。
3.菌种:大肠埃希菌［CMCC(B)44102］ ；枯草芽孢杆菌 ［CMCC(B)63501］；金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］ ；白色念珠菌［CMCC(F)98001］ ；乙型副伤寒沙门菌 ［CMCC(B)10104］；黑曲霉菌［CMCC(F)98003］ 。均从中国医学细菌保藏中心购得的冷冻干燥菌种，按规定复苏、传代、保藏和使用。
二： 菌液制备：
1.接种大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，33℃培养24小时，用0.9％无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释成每1毫升含菌50－100cfu的菌悬液，室温放置2小时使用。2－8℃放置24时使用。
2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，25℃培养48小时，用0.9％无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释成每1毫升含菌50－100cfu的菌悬液，室温放置2小时使用。2－8℃放置24时使用。
3.接种黑曲霉菌新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，27℃培养7天，使大量孢子产生，加入5毫升0.9％无菌氯化钠溶液，用玻璃棒将孢子洗脱，然后用管口带有薄的无菌棉花能过滤菌丝的无菌毛细吸管，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液10倍递增稀释成每1毫升含菌50－100cfu的菌悬液，2－8℃放置一周内使用。
三： 培养基制备：取上述培养基，按照要求各配置100毫升，凝固后，在105度高压20分钟取出为A。再分别取对照培养基按要求配制100毫升为B。
四： 试验方法：做培养基适用性检查（促生长能力和抑制能力；指示能力）
1. 促生长能力和抑制能力
1.1 取大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液各1毫升，分别放入3各平皿中，加入营养琼脂培养基A各20毫升，混匀。同时，做一空白试验为C。同法，加入营养琼脂培养基B。同时，做空白试验为D。33℃培养48小时，回收率%公式＝(A-C)/(B-D)
1.2. 取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液各1毫升，分别放入3各平皿中，加入玫瑰红钠琼脂培养基A各20毫升，混匀。同时，做一空白试验为C。同法，加入玫瑰红钠琼脂培养基B。同时，做空白试验为D。27℃培养72小时
1.3. 取大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌的菌悬液各1毫升，分别放入3各平皿中，加入伊红美蓝琼脂培养基A各20毫升，混匀。同时，做一空白试验为C。同法，加入伊红美蓝琼脂培养基B。同时，做空白试验为D。33℃培养48小时
1.4. 取大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌的菌悬液各1毫升，分别放入3各平皿中，加入甘露醇氯化钠琼脂培养基A各20毫升，混匀。同时，做一空白试验为C。同法，加入甘露醇氯化钠琼脂培养基B。同时，做空白试验为D。33℃培养48小时
2 指示能力试验
2.1 试验：取试验菌0.1ml，分别涂布于被检培养基和对照培养基上，在相应的控制菌检查规定的培养温度及时间下，被检培养基上试验菌的菌落形态，菌落颜色及指示反应情况与对照培养基一致。
2.2 结论：菌的颜色形态同对照。
五： 结论：促生长能力：回收率均大于70％，符合规定。2.抑制能力：均未生长，符合规定。3.指示能力试验：菌的颜色形态同对照，符合规定。
根据以上结果，熔化培养基可采用在105度高压20分钟。
参考文献
［1］ 中国药品检验标准操作规范 2010年版 中国医药科技出版社.
［2］ 中国药典2010年版二部附录
［3］ 检验操作规范 2010年版 国家医药管理局
［4］ 药品GMP指南 2010年版 中国医药科技出版社
