注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠 注射用头孢哌酮/他唑巴坦钠(6:1)的稳定性研究
时间：2019-05-12 03:30:34 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)06－0389－02 【摘要】 目的 考察注射用头孢哌酮他唑巴坦钠(6:1)的稳定性。方法 通过影响因素实验﹑加速实验﹑长期实验，考察注射用头孢哌酮他唑巴坦钠(6:1) 的外观性状、pH值、溶液澄清度与颜色、水分、聚合物、有关物质、含量项的变化。结果 注射用头孢哌酮/他唑巴坦钠(6:1)稳定性较好，可暂定有效期为2年。结论 该研究方法结果可靠，可为其有效期和储存条件提供参考。
【关键词】 头孢哌酮他唑巴坦钠； 稳定性； 高效液相色谱法； 含量
Studies on Stabilities of Cefoperazone Sodium/TazobactamSodium(6:1) for Injection
SHANG-GUAN Dan-gang1,2，LIU Shu-xin1,2，HUANG Li2，DONG Wei-Xing2， WANG Ting1,2
(1.College of Pharmacy，Central South University，Changsha 410013，China；2.Xiangbei Welman Pharmaceutical Co. Ltd，Changsha 410331，China)
注射用头孢哌酮/他唑巴坦钠(6:1)是湘北威尔曼制药股份有限公司针对产β-内酰胺酶耐药菌研制的一种新型抗生素复方制剂。当前国内头孢哌酮单方的耐药性问题极其普遍［1-2］，他唑巴坦是一种不可逆竞争性β-内酰胺酶抑制剂，对多数β-内酰胺酶具有抑制作用［3］，它的加入可有效防止耐药菌对头孢哌酮结构的破坏，因此该复方主要用于产β-内酰胺酶耐药菌感染的治疗。本文对注射用头孢哌酮/他唑巴坦钠(6:1)灭菌粉末的稳定性进行了考察，为确定其有效期和储存条件提供参考依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1100系列高效液相色谱仪（Agilent，德国），葡聚糖凝胶G-10玻璃柱、UVD-680-2紫外检测仪（上海金达生化仪器厂）、HL-2恒流泵（上海沪西分析仪器厂），YB-2型澄明度测定仪（天津市光学仪器厂），PHS-3C酸度计（上海佑科仪器公司），MaxTitra 20V自动水份测定仪（上海天美科学仪器有限公司），BP211D型电子分析天平（精度：十万分之一；赛多利斯科学仪器北京有限公司）。
1.2 试药
注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠（6:1，1.0g/瓶，湘北威尔曼制药股份有限公司，批号：030501、030502、030503）。头孢哌酮对照品（含量为96.5%，中国药品生物制品检定所，编号 130420-200304），他唑巴坦对照品（含量为92.0%，原料药厂提供的精制品），头孢哌酮降解物B对照品（中国药品生物制品检定所，编号：130428-200503），头孢哌酮S异构体对照品（中国药品生物制品检定所，编号：130412-200902）。
2 方法与结果
2.1 酸碱度
取本品加水制成每1 mL中含0.25 g的溶液，依《中华人民共和国药典》2000年版二部附录VI H进行［4］。
2.2 溶液的澄清度与颜色
取本品分别按标示量加水制成每1 mL中含0.1 g的溶液，依《中华人民共和国药典》2000年版二部附录IX B、附录IX A第一法比较测定［4］。
2.3 水分测定
取本品依《中华人民共和国药典》2000年版二部附录Ⅷ M第一法A测定［4］。
2.4 聚合物测定
2.4.1 色谱条件与系统适用性试验［5］
色谱柱为玻璃（内径1.3～1.5 cm，床体积50～60 mL），填充剂为葡聚糖凝胶Sephadex G-10（40～120 μm）；流动相A为含3.5％硫酸铵的0.01 mol?L-1磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠2.19 g和磷酸二氢钠0.54 g，加水1000 mL使溶解，调节pH值至7.0），流动相B为0.01%的十二烷基硫酸钠溶液；流速为1.0 mL?min-1；检测波长为254 nm。以A为流动相，用1.0 mg?L-1蓝色葡聚糖2000溶液进样20 μL进行测定，理论板数为1486.62，拖尾因子为1.47，对照品溶液以B为流动相，重复进样20 μL 5次，峰面积的相对标准差小于5.0％。
2.4.2 对照品溶液的配制
取头孢哌酮对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL中含头孢哌酮100 μg的溶液，摇匀备用。
2.4.3 测定法
取本品适量，精密称定，加水制成每1 mL中含头孢哌酮20 mg的溶液，立即进样20 μL，以流动相A作为流动相进行测定，记录色谱图，以头孢哌酮峰面积计，按外标法计算头孢哌酮聚合物百分含量。
2.5 含量测定
2.5.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为ZORBAX SB-C18（250×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈-磷酸二氢钾溶液（0.03 mol?L-1）-10%四丁基氢氧化铵溶液（190:795:15）并用磷酸调pH值为4.0；流速为1.0 mL?min-1；检测波长为230 nm。同时精密称取头孢哌酮对照品、头孢哌酮降解物B对照品（先以乙腈溶解）、头孢哌酮S异构体对照品、他唑巴坦对照品适量，用少量磷酸盐缓冲液（取0.2 mol?L-1磷酸二氢钠溶液39.0 mL与0.2 mol?L-1磷酸氢二钠溶液61.0 mL，混匀，pH值为7.0）溶解，再加流动相稀释成每1 mL中含上述4种物质各0.2 mg的混合溶液，进样测试，结果头孢哌酮和他唑巴坦的理论板数均大于3000，两组份之间以及与其它杂质峰之间的分离度均符合要求。 2.5.2 溶液配制
2.5.2.1 对照品溶液的配制
精密称取头孢哌酮对照品、他唑巴坦对照品适量，置10 mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲液（取0.2 mol?L-1磷酸二氢钠溶液39.0 mL与0.2 mol?L-1磷酸氢二钠溶液61.0 mL，混匀，调节pH值为7.0）溶解，备用。
2.5.2.2 供试品溶液的配制
取本品装量差异项下的内容物适量，精密称定，加流动相溶解并制成每1 mL中约含头孢哌酮0.86 mg和他唑巴坦0.14 mg的溶液备用。
2.5.3 方法专属性考察
取5份头孢哌酮对照品和他唑巴坦对照品适量，置10 mL容量瓶中，分别做如下处理：2 mL 0.1 mol?L-1盐酸溶液放置0.5 h﹑2 mL 0.1 mol?L-1氢氧化钠溶液放置0.5 h﹑1 mL 30％过氧化氢溶液放置0.5 h﹑105 ℃干燥6 h﹑加水溶解后室温放置12 h，再加水稀释至刻度，用上述色谱条件进行测定。结果显示两主峰间﹑主峰与相邻杂质峰间均能较好分离，说明该方法专属性较强。
2.5.4 线性关系考察
取头孢哌酮对照品适量，精密称定，用水稀释制成每1 mL含头孢哌酮为14.96﹑29.92﹑74.79﹑149.58﹑224.36﹑299.15﹑448.72﹑673.09﹑1346.18和2692.35μg的溶液，分别取10 μL进样测定；取他唑巴坦对照品适量，精密称定，用水稀释成每1 mL含他唑巴坦为13.98、27.97 、69.92、139.84、209.76、279.68、419.52、699.20、1398.4和2796.8μg的溶液，分别取10 μL进样测定。以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标求回归方程，头孢哌酮和他唑巴坦回归方程分别为：A=8.3038C+31.1044，r2=0.9999；A=1.2302C+22.0143，r2=0.9993。结果表明头孢哌酮在14.96～2695.35 μg?mL-1浓度范围内、他唑巴坦在13.98～2796.8 μg?mL-1浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
2.5.5 稳定性及精密度实验
取供试品溶液10 μL，分别于0、2、4、6、12h测定，考察其在12 h内的稳定性，头孢哌酮和他唑巴坦峰面积的RSD分别为0.29%和0.31%（n=5），表明供试液在12h内基本稳定。取供试品溶液10 μL，重复进样6次，测定精密度，头孢哌酮和他唑巴坦峰面积的RSD分别为0.66%和1.30%（n=6），表明精密度良好。
2.5.6 回收率实验
精密称取头孢哌酮对照品和他唑巴坦钠对照品，按处方比例模拟样品9份（三水平各三份），按“2.5.2”项制备溶液，在本色谱条件下测得头孢哌酮和他唑巴坦的回收率分别为100.1%和100.2%，RSD分别0.99%和1.22%。
2.5.7 样品含量测定
取“2.5.2”项下的对照品溶液及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按峰面积外标法计算含量。
2.6 有关物质测定
照含量测定项的色谱条件，取“2.5.2.2”项下的溶液作为供试品溶液；精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液10 μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的20～25％，再取供试品溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液如显杂质峰，记录杂质峰面积总和，计算其占对照品溶液两主峰面积之和的百分比。
2.7 影响因素实验［6］
将市售包装（模制玻璃瓶）的样品开口按下列条件放置。高温实验：在恒温60 ℃的密封洁净容器内放置10 d；高湿实验：在温度25 ℃、相对湿度75％±1％条件下放置10 d；强光实验：在照度为4500 lx±500 lx的光照装置内放置10 d。上述实验条件下样品，分别于0、5、10 d取样，考察其外观性状、pH值、溶液澄清度与颜色、水分、聚合物、有关物质、含量项的变化。
2.8 加速实验
将市售包装样品于温度40±2 ℃、相对湿度75±5%的条件下放置6个月，分别于0、1、2、3、6个月时取样，进行各项测定。
2.9 长期实验
将市售包装样品于温度25±2 ℃、相对湿度60±10%的条件下放置6个月，分别于0、3、6、9、12、18、24个月时取样，进行各项测定。
3 讨论
本文通过二极管阵列检测发现头孢哌酮在228 nm处有最大吸收，在220～280 nm范围内均有较强吸收，他唑巴坦无明显最强吸收峰位，但在230 nm以下吸收较强；同时参照他唑巴坦标准项下的含量测定所选波长［7］并兼顾两组份吸收情况，最终选定230nm作为本色谱条件的检测波长。由于本复方制剂中他唑巴坦含量较少，为尽量兼顾两组份的含量测定，本实验以他唑巴坦标准项下含量测定的流动相为基础，对流动相比例进行优化，根据不同比例的流动相中各组份保留时间、理论板数和分离度情况，最终选定乙腈-磷酸二氢钾溶液（0.03 mol?L-1）-10%四丁基氢氧化铵溶液（190:795:15）（用磷酸调pH值为4.0）作为最佳洗脱条件。在酸、碱、氧化和热等破坏条件下，本品均会产生多个明显杂质峰，说明本品在这些条件下均不太稳定；尤其在稀碱溶液中两主成分峰均全部消失，取而代之的是几个杂质峰，可能是碱性条件下β-内酰胺极易开环，导致整个分子结构被破坏［8-9］，说明头孢哌酮和他唑巴坦钠均对碱极不稳定。
影响因素实验结果显示：本品在高温（60 ℃）、高湿（RH 75%）、强光（4500 lx±500 lx）条件下放置10 d，其性状、有关物质、含量等均有变化，尤以高温条件下含量下降最为显著；在市售包装下水份基本稳定，高湿条件下较易吸潮。表明本品对高温、高湿及强光均不稳定，需遮光、密闭、在阴凉干燥处保存。加速实验和长期实验结果显示：本品在24个月内各项考察指标基本稳定，其性状、高聚物、有关物质及含量均未发生明显变化，表明本品稳定。其有效期参考头孢哌酮［10］可暂定为2年。
参考文献
［1］ 迟明, 李静. 第3代头孢菌的应用与细菌耐药性［J］. 中国微生态学杂志. 2006, 18(2): 160-161.
［2］ 陈会枝. 铜绿假单胞菌对头孢哌酮钠/舒巴坦等12种抗菌药物的耐药分析［J］ 中国煤炭工业医学杂志. 2003, 6(11): 1105-1106.
［3］ 陈昭丽, 王霆, 李苌清, 等. 三唑巴坦对β-内酰胺酶抑制作用的研究进展［J］ 国外医药抗生素分册. 2010, 31(4): 184-189.
［4］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2000年版 二部［S］ 北京: 化学工业出版社, 2000: 附录VI H, IX A, Ⅷ M.
