二十六味通经胶囊中重金属含量测定及其安全性评价
时间：2023-06-16 14:35:04 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
辛青霞,昝占全,赵正峰,李欣,张金魁,切尼项毛,董海红,祁静静,久美彭措1,2,△（1.青海久美藏药药业有限公司,青海 西宁 810000;2.青海久美藏医院,青海 西宁 81000;.青海久美藏药国际研究院,青海 西宁 810000;.青海省都兰县人民医院,青海 都兰 816199）
中藏药材中重金属含量超标的问题是现在备受热议的话题[1-2]，现有研究表明，部分中藏药材中重金属含量过高，使药材的使用存在着重大的安全隐患，是制约中藏医药发展并走向世界的瓶颈之一[3-4]。因国际药品行业对中藏医药质量标准的要求日益严格，尤其是中藏药中残留的重金属会影响其安全性，蓄积导致慢性中毒，重金属进入体内主要与人体内酶蛋白上的-SH和S-S链牢固结合，使得蛋白质变性，酶失去活性，从而出现组织细胞结构及功能上的损害，重金属来源可能为原药材、辅料，提取过程中的溶媒及设备使用过程中掺杂。制订中藏药中重金属元素的质量控制标准的工作是非常有必要且势在必行。二十六味通经胶囊是青海久美藏药药业有限公司的一味国药产品，其主要组成为降香、藏木香、藏茜草、诃子、紫草茸、藏紫草、朱砂、羚羊角、沙棘膏、红花、兔耳草、余甘子、鬼臼、冬葵果、巴夏嘎、火硝、毛诃子、束花报春、硼砂、寒水石、甘青青兰、蒺藜、山矾叶、鬼箭锦鸡儿、假耧斗菜、小伞虎耳草，功能主治为平和龙血，调经活络。用于月经不调、胸背下腹及腰疼痛，该产品疗效明确，在青海以及西北地区口碑较好。
目前对二十六味通经胶囊的副作用未见报道，这对于长期服用二十六味通经胶囊的患者尤显重要。其中胶囊组成成分中含有朱砂毒性成分，火硝、硼砂与寒水石矿物药等，这些成分的存在使人们在使用之前会对安全性产生疑虑，为了打消使用过程中的安全顾虑，有必要对二十六味通经胶囊进行质量控制及安全性评价研究。本实验采用原子吸收法对二十六味通经胶囊中Pb、Cd、As、Hg的含量进行测定并评价其在使用过程中安全性，为制订二十六味通经胶囊中重金属元素的质量控制标准及其临床安全应用提供了一定实验依据。
1.1 仪器 原子吸收光谱仪（型号novAA400P，德国耶拿），微波消解仪（型号TOPwave，德国耶拿），铅、镉、砷、汞元素的空心阴极灯（型号AS-1，北京有色金属研究总院）；
热解涂层石墨管（德国耶拿）；
乙炔气、高纯氩气；
静音空气压缩机（型号HF-6100D，北京豪福机电技衍开发应用有限公司），冷却循环水泵（型号HS-Ш，北京赫斯远大科技有限公司）；
校准合格的聚四氟乙烯容量瓶，烧杯，漏斗，针筒，针头过滤器（0.22μm，13mm，津腾），移液管等。
1.2 试药 铅、镉、砷、汞单元素标准溶液（1000μg/ml，国家有色金属及电子材料分析测试中心）；
硝酸、高氯酸、盐酸、硫酸、磷酸二氢铵、硝酸镁、硼氢化钠、氢氧化钠为优级纯或基准物质，碘化钾、抗坏血酸、盐酸羟胺、高锰酸钾为分析纯，超纯水等。
供试药品二十六味通经胶囊（本厂自制，批号：20170607，20180103，20180614，20181102，20190504)。
测定方法按照《中国药典》第四部2321通则进行测定[5]，精密量取内标标准溶液适量，用水稀释制成每1mL含Ge、In、Bi各1μg的混合溶液。精密量取内标准溶液适量，用5%硝酸逐级稀释，制成浓度为1μg/mL的内标溶液。
2.1 样品消解及供试品溶液配制 供试品溶液的配制采用微波消解法消解样品，取供试品粉末0.5g，精密称定，加硝酸5ml，用TOPwave消解仪执行消解及赶酸程序，用2%硝酸溶液转移至25ml或50ml量瓶中，并稀释至刻度（用于汞的测定，赶酸温度设定在120℃以下，加20%硫酸溶液2ml、5%高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5%盐酸羟溶液至紫红色恰好消失，转入10ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀），即得供试品溶液。
2.2 空白溶液的制备 空白溶液的制备每次测定必须随行空白对照，所采用的试剂种类、用量，操作步骤与操作环境应与供试品溶液的制备相同。
2.3 仪器工作条件 原子吸收分光光度计的工作条件见表1。
表1 原子吸收仪工作条件
2.4 石墨炉升温程序 依照干燥、灰化、原子化、除杂步骤进行，条件见表2。
表2 石墨炉升温程序
2.5 标准溶液的制备 为方便操作，将各单元素标准溶液用2%硝酸溶液稀释成一定浓度的标准储备液，于低温（0℃-5℃）保存。临用前，取此储备液，按要求稀释并制备标准曲线。
分别精密量取Pb、Cd、As、Hg标准储备液（1μg/ml）适量，用2%硝酸溶液制成每1ml分别含Pb为0、5、20、40、60、80μg/L的溶液。Cd为0、0.5、1、1.5、2μg/L；
As为0、5、10、20、30μg/L；
Hg为0、2、6、10、14、18μg/L的系列浓度标准溶液。
3.1 标准曲线的绘制 按照2.3项下工作条件分别进行测定，以C（μg/L）为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，4种线性关系良好且相关系数均在0.9991（含）以上，且回收率范围均在95%-105%，具体结果见表3。
表3 4种重金属及有害元素的标准曲线回归方程、线性范围、检测限、定量限
3.2 稳定性试验 取二十六味通经胶囊0.5g，按“2.1”项中的方法制备供试品溶液，Pb、Cd、As、Hg测定前按照“2.5”标准曲线溶液配制，按“2.3”项下条件，于0、4、8、12、24小时测定5次，含铅量平均值46.2mg·kg-1，RSD=1.03%；
含镉量平均值0.182mg·kg-1，RSD=2.09%；
含汞量平均值3750mg·kg-1，RSD=0.99%；
含砷量平均值15.98mg·kg-1，RSD=1.86%。结果表明所建立的方法稳定性良好。
3.3 精密度试验 精密吸取已制备好的Pb、Cd、As、Hg标准溶液，分别将各元素的最高梯度浓度溶液连续测定5次，读取吸光度值，计算得到Pb、Cd、As、Hg元素吸光值的RSD分别为1.73%、2.19%、2.55%与1.27%，结果说明仪器精密度良好。
3.4 重复性试验 按2.3项下条件测定，取同一批号样品，分别取样平行测定5次，分别求得Pb、Cd、As、Hg含量的RSD为1.55%、1.71%、1.38%与1.60%，说明重复性良好。
3.5 加样回收试验 精密吸取适量二十六味通经胶囊置100mL锥形瓶中，并按2.3项下原子吸收分光光度计工作条件分别测定，计算回收率。
2017 年-2019年，共生产二十六味通经胶囊5批，测定留样产品中铅、镉、砷和汞含量及加标回收率，结果见表4。
由表4数据可知，总镉含量远低于《中国药典》中单味药材限量0.3mg/kg，总铅含量在50mg/kg以下，总砷含量低于20mg/kg，总汞含量相对较高，平均值为3745mg/kg。各元素单次测定加标回收率均在90%-110%，符合药典规定。建议按照《中国药典》2015版四部通则2321中原子吸收分光光度法测定该品种中各重金属元素总量，并将限量定为：总镉含量不得过0.5mg/kg，总铅含量不得过100mg/kg，总砷含量不得过20mg/kg（与原有砷盐限度检查限量保持一致），总汞含量不得过5000mg/kg。
表4 5批二十六味通经胶囊重金属元素含量及加标情况
4.1 重金属危害讨论 重金属对人体的新陈代谢和正常的生理功能具有明显的伤害作用，并抑制人体正常生理作用的发挥，同时人体内重金属含量过量会导致各种疾病的发生。重金属危害描述：重金属进入人体后，在体内会严重蓄积，从而导致一系列慢性疾病，由于现在环境污染的加重，重金属往往暴露于人体，然后与体内有机成分结合形成金属螯合物，机体中的蛋白质与其相结合，发生功能性损害甚至致突变、致畸[6-7]。
铅在人体中主要损害神经系统，肾脏和造血器官。主要存在以下几种现象：小儿发育迟缓，注意力不集中，智力低下，听觉出现障碍等，若为慢性中毒，则导致铅毒性脑病、急性肾功能衰竭[8]等，由于铅的使用会使小儿智力低下，故取消了铅的暂定每周耐受摄入量，无法设置其安全限值，铅摄入量应尽可能低，这是由联合国粮农组织、世界卫生组织联合食品添加剂专家委员会（JECFA）（Provisional Tolerable Weekly Intake，PTWI）认定的[9]。
镉致肾损伤是镉污染对人体的主要慢性危害。一般认为镉所致的肾损伤是不可逆的，慢性染镉造成的肾损伤波及到整个肾脏，进入人体的镉，主要在肝脏中诱导MT的合成并与之结合成Cd-MT。该复合物可通过血液运输达到肾脏，经肾小球滤过后大部分被肾小管吸收，然后释放游离的镉，产生毒性[10]。砷主要是通过干扰酶的转录调控能力，从而影响各功能，伴随的疾病主要有糖尿病、外周神经病变及高血压等疾病，还可引起造血抑制、肝脏损伤、感觉出现紊乱及体质量减轻[11]，诱导人软骨细胞衰老[12]。
汞主要通过呼吸道、消化道及皮肤黏膜等途径进入人体产生危害，容易引发神经系统的功能障碍，从而造成人体头晕头痛等神经衰弱综合征[13]。除此之外，汞中毒还会造成中毒性心肌炎等[14]。
从上述各重金属元素进入人体的危害性得出，二十六味通经胶囊的安全性评价是很有必要的，从而做到公众放心，临床用药安全。
4.2 方法讨论 重金属及有害元素测定方法通常采用目视法、分光光度计法、比色法。其中铅元素测定还可采用铅元素原子吸收法、火焰光度法、氢化物法；
镉元素还可采用火焰光度法。由于比色法在重金属总量测定中较为常见，仪器操作简单，但结果的准确度和选择性较差，且受多种金属干扰，目前石墨炉原子吸收法灵敏度已达（10-9-10-14g），可满足多种金属同时检测。本实验中采用的石墨炉原子吸收法测定二十六味通经胶囊中Pb、Cd、As、Hg含量，该方法重复性好，操作灵敏可靠、简单，实用性强，可用于二十六味通经胶囊的质量控制。在实验期间需要注意，为了避免在加热过程中样品所含重金属损失，在对样品处理之前，需要对温度严格控制，防止其沸腾、糊化，经查阅多种关于安全性评价方法及重金属元素的相关文献，对于重金属测定有多种方法，因公司经费有限，现只能采用原有原子吸收技术来测定重金属元素含量，测得结果与药典标准一致。本公司下一步希望通过ICP-MS仪，对原子吸收及各方法作出比较，得出更适合测定重金属元素的方法，从而打消使用者对重金属元素的顾虑，做到临床安全用药。
4.3 重金属安全性讨论 通过对二十六味通经胶囊中重金属元素含量测定及安全性评价分析得出[15]，二十六味通经胶囊中重金属含量均未超标，均符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》和《中国药典》的规定限范围内，限量定为：总镉含量不得过0.5mg/kg，总铅含量不得过100mg/kg，总砷含量不得过20mg/kg（与原有砷盐限度检查限量保持一致），总汞含量不得过5000mg/kg。从数据比对分析来看，二十六味通经胶囊药用较安全，可为临床安全用药提供一定的理论基础，故对本制剂中所含重金属元素进行安全性评价研究具有重大意义。
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