高效液相色谱法测定鸡精中谷氨酸钠的含量
时间：2022-09-28 13:05:07 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
刘亚方 张治云 姜鹰雁 国璐路 杨琪
摘要：目的 建立一种高效液相色谱法定量检测鸡精中谷氨酸钠含量的方法。方法 采用Ultimate XB-NH2色谱柱，柱温35 ℃;以0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至3.3）-乙腈为流动相，流速：2.0 ml/min;检测波长：210 nm。结果 谷氨酸钠浓度在50.36～2014.40 ?g/ml范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9997），平均加样回收率为99.71 %，RSD为1.18 %（n=9），检出限为15.11 μg/ml。结论 该方法操作简便，专属性强，准确度高，可用于鸡精中谷氨酸钠的定量检测。
关键词：高效液相色谱法;谷氨酸钠;鸡精;含量测定
谷氨酸钠，化学名α-氨基戊二酸一钠，是鸡精中的主要呈味剂，是反映产品鲜度的主要物质[1]，因此研究鸡精中谷氨酸钠含量测定方法具有一定的实用价值。谷氨酸钠含量测定可采用高氯酸滴定法、旋光法、酸度计法和凯氏定氮法[2-4]，但鸡精中除含有谷氨酸钠外，成分中还含有食盐、白砂糖、香精等添加剂，由于干扰物质较多，采用上述检测方法测定其谷氨酸钠专属性差。本文采用HPLC法对鸡精中的谷氨酸钠进行分离检测，可有效消除产品中各添加剂的干扰，准确定量，专属性强。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters e2695高效液相色谱仪;Mettler-Toledo XS205电子分析天平;Mettler-Toledo Seven Excellence pH计。
1.2 试药
L-谷氨酸单钠盐一水合物（Sigma-Aldrich）;磷酸二氢钾（分析纯）;磷酸（优级纯）;乙腈（色谱纯）;盐酸（分析纯）;水为超纯水。鸡精：品牌A，B，C均为市售产品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Ultimate XB-NH2（4.6×250 mm，5 ?m）;流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至3.3）-乙腈（27：73）;流速：2.0 ml/min;柱温：35 ℃;检测波长：210 nm;进样体积：10 ?l。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取谷氨酸钠202.86 mg置100 ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液;精密量取上述贮备液2.5 ml置10 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
2.2.3 供试品溶液 取鸡精25 mg，精密称定，置25 ml量瓶中，加溶剂适量，超声10 min，用溶剂稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，取续滤液备用。
2.2.4 溶剂 0.1 mol/L盐酸溶液。
2.3专属性研究
分别精密量取溶剂和对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果表明，空白溶液无干扰峰，表明本法专属性强。
2.4 线性和范围
精密量取“2.2.1”项下对照品贮备液0.25，1.0，2.5，1，1.5，2.0 ml分别置10 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液，依法测定，记录色谱图。以峰面积A对浓度C绘制标准曲线。进行线性回归，得回归方程为Y=164.39X-1298.6（r=0.9997）。结果表明，谷氨酸钠在50.36～2014.40 ?g/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.5 定量限和检出限
定量限：精密量取“2.2.2”项下标准溶液1.0 ml置10 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，依法测定，所得谷氨酸钠峰信噪比约为10：1，即谷氨酸钠定量限为50.36 μg/ml。该浓度溶液连续测定6次峰面积RSD为2.53 %。
检出限：精密量取定量限溶液3.0 ml置10 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，依法测定，所得谷氨酸钠峰信噪比约为3：1，即谷氨酸钠检出限为15.11 μg/ml。
2.6 重复性试验
按“2.2.3”项下方法配制6份A品牌鸡精供试品溶液，依法测定谷氨酸钠含量，结果谷氨酸钠含量的平均值为44.68 %，RSD为0.91 %，表明方法测定样品的重复性良好。
2.7 回收率试验
取9只25 ml量瓶，分别精密加入A品牌鸡精12mg，平均分为3组，取“2.2.1”项下的对照品贮备液，第一组加入2.5 ml，第二组加入3.75 ml，第三组加入5.0 ml，分别加空白溶液适量，超声10 min，并用溶剂稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，依法测定，，计算谷氨酸钠回收率。结果表明，谷氨酸钠的平均回收率为99.71 %，RSD为1.18 %，表明该方法准确度良好。
2.8 样品测定
取3种市售鸡精样品，按“2.2.3”项下分别配制3份供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品溶液中谷氨酸钠含量，结果见表1。
3 讨论
谷氨酸钠分子结构中含有氨基和羧基，属于两性化合物，极性较大，实验过程中，曾尝试采用不同色谱柱进行分离，结果谷氨酸钠均流出较快，与溶剂峰不能完全分离，不能准确定量。氨基柱以氨基丙基硅烷键合硅胶为填充剂，适合于测定极性较大的化合物，本文采用氨基柱对鸡精中谷氨酸钠进行分离，得到了理想的结果。在供试品溶液制备过程中，分别采用不同溶液进行提取，结果显示溶剂用水和流动相时，所得谷氨酸钠峰拖尾严重，采用0.1 mol/L盐酸溶液进行提取，所得谷氨酸钠峰对称性良好，回收率高，最终确定溶剂为0.1 mol/L盐酸溶液。文中建立的检测方法，采用常规流动相洗脱，紫外檢测器检测，无需进行衍生化处理，操作简便、准确度高，可用于鸡精中谷氨酸钠的定量检测。
参考文献：
[1]汪辉，徐睿鑫，李晰晖，等. 蒸发光散射-亲水作用色谱法测定味精和鸡精中的谷氨酸钠[J].中国食品卫生杂志，2015，27（3）：262-264.
[2]韩晓林.味精中谷氨酸钠含量的测定[J].中国井矿盐， 2010（05）：39-40.
[3]张君.味精中谷氨酸钠含量三种试验方法的比较[J]. 新农业， 2018（9）：7-8.
[4]胡玉赭.关于味精中谷氨酸钠含量测定方法的探讨[J].科技信息，2011，（21）：620.42E6533B-1F45-4BD0-8191-6ED5CD3CBB93
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