外周血PTX3、LAC、miR-155在肺部感染表达及对生存状况的预测价值
时间：2023-06-23 09:40:05 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
何凌，鲁玉婷
（1.漯河市中心医院呼吸与危重症医学科，河南 漯河 462000；
2.漯河市中医院内二科，河南 漯河 462000）
重症肺部感染多由致病力强的细菌或多种细菌混合感染所致，病程进展迅速，可造成多器官功能性衰竭，最终导致死亡[1-2]。因此早期及时准确诊断，给予积极抗感染治疗对控制肺部感染病情进展及提高生存率具有积极意义。研究显示，肺防御机制可避免宿主受潜在病原体侵害，而先天免疫通过调控可溶性模式识别受体的分泌，有助于识别病原体与受损组织[3]，正五聚蛋白3（PTX3）作为一种可溶性模式识别受体，在宿主免疫反应调控过程中可能发挥重要作用[4]。同时，文献证实，微小RNA（mi RNA）在感染性疾病的免疫调控过程中具有重要作用[5]，而miR-155作为其重要成员之一，参与B细胞应答与T细胞应答。另有学者认为，血乳酸（LAC）水平升高是组织灌注与氧输送不足的早期敏感生化指标，有望成为判断疾病严重程度及预后的指标之一[6]。但外周血PTX3、LAC、mi R-155不同表达水平与肺部感染患者生存状况的关联性仍需大量数据支持。基于此，本研究综合分析外周血PTX3、LAC、miR-155在肺部感染表达及对生存状况的预测价值。报告如下。
1.1 一般资料 选取2017年10月至2019年10月在我院呼吸重症监护病房接受治疗的重症肺部感染患者102例作为研究组，同期选取74例健康体检者作为对照组。其中研究组女40例，男62例，年龄55～75岁，平均（60.28±4.15）岁；
对照组女29例，男45例，年龄51～76岁，平均（59.77±3.89）岁。两组基本资料（年龄、性别）均衡可比（P＞0.05）。本研究经我院医学伦理委员会审批同意。
1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）研究组均符合以下诊断标准：属重症肺部感染：①呼吸频率＞30次/min、血气分析异常；
②体温≥39℃或≤36℃；
③经胸部CT检查显示肺渗出性病理变化或入院48 h浸润面积＞50.0%；
④急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ≥8分。（2）两组临床资料完整，且患者及家属均签署知情同意书。
排除标准：（1）合并脑血管意外、重度心力衰竭、急性心肌梗死、恶性肿瘤等疾病；
（2）近14 d内伴有其他部位严重感染、创伤或活动性肺结核者；
（3）近期有激素或其他免疫抑制剂使用史者；
（4）存在其他部位感染者；
（5）合并甲状腺功能异常、自身免疫性疾病、呼吸系统慢性疾病者；
（6）精神行为异常者。
1.3 方法
1.3.1 检测方法 （1）空腹取6 mL静脉血，3 000 r/min离心12 min，分离取血清，置于-70℃低温保存：①采用双抗夹心酶联免疫吸附法检测PTX3水平，试剂盒购自杭州联科美讯生物医药技术有限公司；
②采用实时荧光定量PCR仪检测miR-155水平，仪器购自美国ABI公司，具体操作：将250 μL血清置入1.5 mL已除酶的离心管内，加入焦炭酸二乙酯250μL稀释，后分别加入水饱和酚、三氯甲烷250μL，震荡混匀，静置60 s，离心收集上清液，置入醋酸钠溶液 （约为上清液体积的10.0%）、异丙醇，震荡混匀，离心去除上清液，留取RNA沉淀物，置入75%乙醇1 mL，涡旋混匀离心，留取沉淀，加入焦炭酸二乙酯水20 mL，溶解RNA沉淀，置入-70℃低温保存。利用Sanger microRNA序列数据库确定miRNA特征。采用反转录引物及PCR正向引物、负向引物，取反转录引物（10μmol/L）1μL，加入RNase Free H2O 9μL配制成工作液1μmol/L。反转录条件：30℃10 min，42℃20 min（反转录反应），85℃5 min（酶失活反应），4℃5 min。于RT-PCR反应体系加入反应产物1μL，反应条件：预变性95℃30 s，循环40次。应用公式2-ΔΔct计算miR-155相对表达量。（2）空腹取2 mL桡动脉血，采用床边血气分析仪（型号：Cobosb 221）检测LAC水平，仪器购自瑞士罗氏公司，严格按照仪器说明书执行。
1.3.2 治疗方法 研究组均予以抗感染、营养支持、化痰、雾化吸入、调整水电解质及血糖等基础治疗。抗生素应用则根据痰培养结果筛选。
1.4 观察指标 （1）比较两组外周血PTX3、LAC、mi R-155水平。（2）比较研究组存活及死亡患者入院前、入院后3 d、7 d外周血TX3、LAC、miR-155水平。（3）分析肺部感染患者死亡的影响因素。（4）分析入院后3 d、7 d外周血TX3、LAC、miR-155水平单一及入院7 d外周血各指标联合对肺部感染患者生存状况的预测价值。（5）分析入院后3 d、7 d外周PTX3、LAC、mi R-155水平与肺部感染患者生存状况的关系。
1.5 统计学方法 采用SPSS 22.0软件分析处理数据，计量资料采用（±s）表示，两组间比较采用两独立样本t检验，计数资料用n（%）表示，组间比较采用χ2检验，采用Logistic进行多因素回归分析，采用受试者工作特征曲线（ROC）分析预测价值，以卡普兰-迈耶曲线（Kaplan-Meier，KM）进行生存曲线分析，采用Log-Rank检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.1 两组外周血各指标表达 研究组患者外周血PTX3、LAC、mi R-155水平显著高于对照组（P＜0.05）。见表1。
表1 两组外周血各指标表达（±s）
表1 两组外周血各指标表达（±s）
组别 n研究组对照组F值P值102 74 P T X3（ng/mL） L A C（mm ol/L）1.66±0.50 1.01±0.30 9.954＜0.001 150.19±45.06 50.38±15.11 18.310＜0.001 mi R-155 1.25±0.38 0.79±0.24 9.467＜0.001
2.2 研究组存活及死亡患者外周血各指标表达随访28 d，研究组存活82例，死亡20例。研究组死亡患者入院后3 d、7 d外周血TX3、LAC、miR-155水平显著高于生存患者（P＜0.05）。见表2。
表2 研究组存活及死亡患者外周血各指标表达（±s）
表2 研究组存活及死亡患者外周血各指标表达（±s）
项目 组别P T X3（ng/mL）n 82 20 L A C（mm ol/L）82 20 mi R-155存活死亡t值P值存活死亡t值P值存活死亡t值P值82 20入院当天1.66±0.50 1.67±0.49 0.081 0.936 149.82±44.94 151.69±42.89 0.168 0.867 1.25±0.38 1.27±0.37 0.212 0.833入院后3 d 1.53±0.46 1.99±0.90 3.234 0.002 120.29±36.12 156.41±46.92 3.771＜0.001 1.13±0.34 1.47±0.42 3.823＜0.001入院后7 d 1.40±0.71 2.12±0.66 4.120＜0.001 110.36±55.18 165.54±49.62 4.085＜0.001 1.02±0.51 1.53±0.46 4.083＜0.001
2.3 Logistic回归性分析影响患者死亡因素 以肺部感染患者是否死亡为因变量，入院后3 d、7 d PTX3、LAC、mi R-155为自变量进行Logistic回归性分析，结果发现，入院后3 d、7 d PTX3、LAC、mi R-155均为影响肺部感染患者死亡的独立危险因素（P＜0.05）。见表3。
表3 Logistic回归分析影响患者死亡因素
2.4 ROC分析各指标单一预测生存状况价值ROC曲线分析结果显示，各指标预测生存状况价值的AUC结果为入院后7 d miR-155＞7 d LAC＞7 d PTX3＞3 d miR-155＞3 d LAC＞3 d PTX3。见表4、图1。
表4 ROC分析各指标单一预测生存状况价值
图1 各指标单一预测生存状况价值的ROC曲线
2.5 ROC分析各指标联合预测生存状况价值 通过建立入院后7 d各指标与生存状况关系的Logistic回归模型将入院后7 d各检验指标转化得到联合检测预测概率的预测变量PRE_1，并得到死亡 预 测 值 回 归 方 程 为：P=1/[1+e-（-4.716+1.674X1+1.059X2+1.562X3）]（X1、X2、X3分别 为7 d PTX3、7 d LAC、7 d miR-155值），将每组各指标代入方程得到预测概率值P，若P值≥PRE_1的临界值即预测死亡。结果显示，联合预测死亡的AUC为0.890（95%CI：0.812～0.943），敏感度为80.00%，特异度为86.59%。见图2。
图2 各指标联合预测生存状况价值的ROC曲线
2.6 外周血各指标与生存状况关系 根据ROC分析PTX3、LAC、miR-155最佳截断值，入院后3 d、7 d PTX3分别＞1.46 ng/mL、＞1.59 ng/mL患者为PTX3高危组，LAC分别＞151.06 mmol/L、＞175.6 mmol/L患者为LAC高危组，miR-155分别＞1.46、＞1.50患者为miR-155高危组。K-M曲线分析，入院后3 d、7 d PTX3、LAC、miR-155高危组生存率低于PTX3、LAC、miR-155低危组（P＜0.05）。见图3-5。
图3 PTX3高危及低危组生存曲线
图4 LAC高危及低危组生存曲线
图5 miR-155高危及低危组生存曲线
既往主要应用各种评分系统评估肺部感染患者预后结局，虽操作简便，但准确度较差，而CRP等常用生化指标又缺乏特异度，应用于临床预后评估价值有限。因此，探讨一种敏感度与特异度均较好的指标对于早期评估肺部感染患者预后具有重要临床价值。
3.1 外周血PTX3在肺部感染表达及对生存状况的预测价值 新近研究显示[7-9]，PTX3作为一种典型的急性期蛋白，与感染预测典型指标CRP相比，能迅速反映组织局部炎症及损伤，有望成为临床更加敏感的血清学标志物。经检测肺部感染患者外周血PTX3水平发现，外周血PTX3水平在肺部感染患者中增加，与董春艳等[10]研究观点基本一致，说明PTX3可能在肺部感染患者炎症反应中发挥重要作用。肺部感染可能激活肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）等炎症信号因子，诱导单核细胞、巨噬细胞等释放组织因子、PTX3，而PTX3通过正反馈一定程度可增加组织因子表达[11-12]；
同时PTX3可与纤维母细胞生长因子2、补体clq等多种分子结合，激活经典补体途径，进而引发补体分子clq、c3b沉积，提高黏附分子表达，加重肺组织损伤。提示外周血PTX3有利于早期预测肺部感染严重程度，制定合理治疗方案。ROC曲线分析提示，肺部感染患者入院后7 d外周血PTX3截断点为1.59 ng/mL时，对肺部感染患者生存状况评价敏感度高于同时期的外周血miR-155、LAC，在某种程度上间接反映了外周血PTX-3对肺部感染患者的近期预后具有研究潜力。进一步经K-M曲线可知，入院后3 d、7 d外周血PTX3高表达可能会增加肺部感染患者死亡风险，结合既往研究分析[13]，可能与外周血PTX3过度表达对中性粒细胞在肺部聚集产生抑制作用有关。
3.2 外周血miR-155在肺部感染表达及对生存状况的预测价值miRNA-155在巨噬细胞、树突状细胞等多种免疫细胞中表达，对机体免疫调控起重要作用[14-15]。目前，关于血清miRNA-155与肺部相关疾病关系的研究较少，与肺部感染关系的研究也鲜有报道。李男等[16]报道指出，miR-155可能在肺部疾病中占据重要地位。本研究结果显示，外周血mi R-155水平在肺部感染患者中过度表达。mi R-155通过抑制其下游的靶标，即沉默细胞因子信号转导抑制因子1表达，引发炎性反应失调，从而引发肺损伤[17]，并通过调节核转录因子（NF-κB）信号，上调转录因子fos/jun，从而调节微生物感染的一系列变化，参与病情进展过程。推测miR-155可能作为潜在靶点用于肺部感染的诊治。本研究通过Logistic多因素回归性分析，入院后3 d、7 d mi R-155是影响肺部感染患者死亡的独立危险因素，机制考虑为外周血miR-155水平上调可能加重肺部浸润炎症细胞，增多细胞因子，加剧肺组织损伤。通过绘制ROC曲线发现，mi R-155预测肺部感染患者生存状况特异度可达95.12%，有望成为预测肺部感染患者预后的有效指标之一。
3.3 外周血LAC在肺部感染表达及对生存状况的预测价值LAC是葡萄糖无氧代谢产物，当机体出现缺氧时，易并发血LAC升高[18-19]，Hanis等[20]研究还显示，LAC增加表明机体组织及细胞灌注与氧合受损。外周血LAC水平虽能反映某一时间点内病情状况，但受肾脏、肝脏及既往药物应用史等基础状态的影响，患者静态LAC水平应激强度往往不甚理想，难以有效准确反映患者预后改变，故本研究选择动态监测肺部感染患者外周血LAC水平，数据表明，肺部感染死亡患者入院后3 d、7 d外周血LAC水平高于肺部感染存活患者，与丁莉等[21]研究结果基本一致，外周血LAC表达上调可能会加重组织灌注不足，引发严重组织缺氧，增加死亡风险，提示外周血LAC对肺部感染患者生存状况具有一定预测价值。另外，入院后7 d PTX3、LAC、miR-155均是肺部感染患者死亡发生的独立危险因素，故三者联合对于评估肺部感染患者生存状况具有较好基础，本研究通过建立入院后7 d各指标与生存状况关系的Logistic回归模型将入院后7 d各检验指标转化得到联合检测预测概率的预测变量，利用此变量预测肺部感染患者死亡发生的AUC值达0.890，较单独检测得到明显提升，提示联合预测肺部感染患者死亡具有更高的临床价值。推测三者联合有望成为预测肺部感染患者生存状况的有效手段，从而为临床诊治、预后评估提供新方向。
综上可知，外周血PTX3、LAC、miR-155在肺部感染患者中过度表达，三者联合具有预测肺部感染患者生存状况的潜力，可为临床诊治与预后评估提供科学指导。
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