慢性乙型肝炎病人血清缺氧诱导因子1α水平及其诊断肝纤维化的价值
时间：2023-06-07 11:25:21 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
魏晓霞，周艳彩，卓亚，朱斌
作者单位：新乡医学院第一附属医院感染科，河南 新乡 453100
慢性乙型肝炎（CHB）若不及时治疗可逐渐进展到肝纤维化，目前肝组织学活检仍是评估肝纤维化严重程度的金标准，但因其属于有创检查故而在临床应用较为局限。Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白（laminin，LN）是目前临床上常用的反映CHB肝纤维化的血清学指标，但诊断肝纤维化的灵敏度和特异度不高［1-2］。因此，积极寻找无创诊断CHB肝纤维化的血清学标志物已经成为研究热点。缺氧诱导因子1α（HIF-1α）是调节细胞参与缺氧反应的转录调控因子，研究证实HIF-1α能够调控与肝纤维化相关基因的表达而参与肝纤维化的进展［3-4］。丁体龙等［5］采用免疫组化法检测后发现HIF-1α在CHB病人肝脏组织中表达上调，但目前关于CHB病人血清中HIF-1α水平报道较少。本研究通过检测CHB病人血清中HIF-1α表达水平并探讨其诊断肝纤维化的临床效能，为CHB病人肝纤维化的诊断、治疗及动态检测提供理论依据。
1.1 一般资料选取2017年6月至2019年1月于新乡医学院第一附属医院感染科住院治疗的80例CHB病人作为研究对象。男38例，女42例，年龄（54.02±7.25）周岁，病程（16.07±6.33）年。纳入标准：①CHB诊断明确，参考2015年中华医学会肝病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南（2015更新版）》［6］；
②肝脏穿刺组织学活检结果完善；
③纳入研究时1年内未进行抗病毒和抗纤维化药物治疗。排除标准：①CHB近期急性加重者；
②合并丙型、戊型、丁型肝炎、自身免疫性肝病、药物性肝损伤、肝癌等；
③哺乳、妊娠及精神类疾病者；
④3月内采用激素治疗者。另纳入30例健康体检者作为对照组，男14例，女16例，年龄（53.14±7.62）周岁。两组研究对象性别、年龄对比差异无统计学意义（P>0.05）。本研究中上述所有研究对象均知情同意且签署知情同意协议书。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。
1.2 方法
1.2.1 肝纤维化指标的检查 所有研究对象入院时血清肝纤维化指标如PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN水平由该院检验科采用放射免疫法检测。
1.2.2 CHB病人肝组织活检CHB病人入院时经充分沟通并取得知情同意，在B超引导下行肝脏穿刺，取长度约为1 cm以上肝脏组织置入含有10%甲醛的EP管中送病理科待检。参考文献［7］，肝纤维化程度采用S0~S4分期评估，其中S0为无肝纤维化、S1~S2代表轻度肝纤维化、S3~S4代表中重度肝纤维化。
1.2.3 血清HIF-1α表达水平 所有研究对象均空腹抽取外周静脉血5 mL，离心并获取上层血清备用。血清HIF-1α水平采用酶联免疫吸附测定（ELI⁃SA）试剂盒检测，试剂盒购买自上海江莱生物科技有限公司（中国）。所有操作步骤均按照试剂盒说明书步骤进行。
1.3 统计学方法采用SPSS 22.0软件进行数据处理。计量资料符合正态分布，以±s表示，两组间比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用SNK-q检验；
计数资料以频数表示，采用χ2检验；
相关性检验采用Pearson相关性分析；
以受试者操作特征曲线（ROC曲线）探讨血清HIF-1α诊断肝纤维化的临床效能。以P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 CHB病人肝脏活检情况本研究80例CHB病人根据肝脏活检情况分为S0组（20例）、S1~S2组（39例）、S3~S4组（21例），S0组、S1~S2组、S3~S4组及对照研究对象在性别和年龄上比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
表1 对照组健康人和慢性乙型肝炎（CHB）组病人一般资料比较
2.2 CHB病人和对照组血清肝纤维化指标及HIF-1α水平分析S0组、S1~S2组、S3~S4组病人血清PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN及HIF-1α水平均显著高于对照组（P<0.05）；
S3~S4组病人血清PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN及HIF-1α水平均显著高于S0组和S1~S2组（P<0.05）；
S1~S2组病人血清PCⅢ、透明质酸、LN及HIF-1α水平均显著高于S0组（P<0.05）。见表2。
表2 对照组健康人和慢性乙型肝炎（CHB）组病人血清肝纤维化指标及缺氧诱导因子1α（HIF-1α）水平的比较/（μg/L，±s）
表2 对照组健康人和慢性乙型肝炎（CHB）组病人血清肝纤维化指标及缺氧诱导因子1α（HIF-1α）水平的比较/（μg/L，±s）
注：PCⅢ为Ⅲ型前胶原，LN为层粘连蛋白，S0为无肝纤维化、S1~S2为轻度肝纤维化、S3~S4为中重度肝纤维化。①与对照组比较，P<0.05。②与S0组比较，P<0.05。③与S1~S2组比较，P<0.05。
组别对照组S0组S1~S2组S3~S4组F值P值例数30 20 39 21 PCⅢ7.12±2.31 25.02±8.45①34.25±7.11①②46.87±8.36①②③29.13<0.001Ⅳ型胶原7.65±2.42 25.71±6.33①28.14±7.29①40.36±8.93①②③35.01<0.001透明质酸21.96±5.15 42.68±9.37①56.82±10.03①②97.45±11.38①②③28.62<0.001 LN 8.81±2.24 26.38±6.98①32.65±7.44①②58.07±9.28①②③31.25<0.001 HIF-1α 35.69±7.25 46.37±9.15①60.31±10.02①②89.39±12.07①②③86.24<0.001
2.3 CHB病人血清HIF-1α与肝纤维化指标的相关性分析Pearson相关性分析结果显示，CHB病人血清HIF-1α水平与PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸和LN均呈现显著正相关性（P<0.05），相关系数分别为0.54，0.25，0.42，0.13。
2.4 CHB病人血清肝纤维化指标及HIF-1α水平诊断肝纤维化的价值以所有CHB病人血清HIF-1α、PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸和LN水平作为检验值，其中S0期为阴性，S1~S4期为阳性，绘制ROC曲线发现，HIF-1α诊断CHB病人发生肝纤维化的AUC为0.947，均显著高于PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸和LN（Z=3.84，P<0.001；
Z=3.98，P<0.001；
Z=2.62，P=0.017；
Z=2.85，P=0.008）。当HIF-1α的截断值为71.26μg/L时，诊断灵敏度和特异度分别为92.36%和95.26%。见表3。
表3 慢性乙型肝炎（CHB）80例肝纤维化指标和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）诊断肝纤维化的临床效能
肝纤维化是多种因素导致肝内肝星状细胞（HSC）活化并大量增殖，肝组织内细胞外基质生成过多或降解减少导致肝脏内胶原蛋白过度沉积，最终引起肝组织结构或功能异常［8-10］。肝纤维化是CHB向肝硬化及肝癌发展的必经环节，同时，指南［6］及其他研究［11-13］也指出干扰素及核苷类药物在一定程度上能够改善甚至逆转CHB肝纤维化，因此尽早评估CHB病人肝纤维化严重程度并积极治疗对延长病人的生存周期具有极其重要的意义。尽管肝脏组织学活检仍是诊断CHB肝纤维化的“金标准”，但其属于一种有创检查，存在出血及感染、无法动态监测CHB病人肝纤维化的严重程度及病理诊断医师水平高低影响评估结果等多种缺点［14-15］，使其难以在临床上广泛应用，因此致力于积极寻找诊断CHB肝纤维化的标志物已经成为研究热点。
HIF-1α是机体调节氧代谢的重要转录因子，近年来研究发现HIF-1α在肝纤维化的发病机制中扮演了重要作用，Moczydlowska等［4］在小鼠肝纤维化的肝脏组织中发现HIF-1α蛋白表达水平显著升高，且与肝纤维化严重程度均呈现显著正相关性；
而Mesarwi等［16］进一步证实HIF-1α基因缺失的小鼠α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原蛋白表达水平显著降低，而α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原蛋白与肝纤维化的发展密切相关［17］。此外，在机制上，Kim等［18］发现HIF-1α促进肝纤维化的发展可能与激活转化生长因子-β（TGF-β）信号通路有关，研究发现肝纤维化小鼠模型在采用TGF-β1型受体激酶抑制剂预处理后，能抑制HIF-1α诱导的TGF-β信号通路的激活，并显著减少肝脏细胞外基质的沉积及肝纤维化程度；
Wang等［19］采用丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）磷酸化抑制剂PD98059预处理HSC后发现，HIF-1α泛素化水平得到显著提高并抑制HIF-1α易位到细胞核中，从而减少HSC的激活，提示HIF-1α促进肝纤维化的发展可能与抑制MAPK信号通路有关；
肝纤维化的发生与肝内新生血管大量形成也具有显著关系，血管内皮生长因子（VEGF）的上调与新生血管有关，在一项心肌梗死的动物研究中发现［20］，VEGF属于HIF-1α的下游基因，HIF-1α能够显著增加VEGF的表达，因此推测HIF-1α通过增加VEGF的表达而参与肝纤维化的发生。
本研究发现，与对照组比较，CHB病人肝纤维化指标（PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN）及HIF-1α均有不同程度的升高，且在不同严重程度的肝纤维化病人中上述指标均存在显著差异，说明随着CHB病人肝纤维化严重程度的加重，4种临床上常用的反映肝纤维化的指标PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN均显著上升，此外，血清中HIF-1α水平也逐渐升高，这与丁体龙等［5］研究结果基本一致。相关性分析也显示，CHB病人血清中HIF-1α水平与PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN均呈现显著正相关性，提示HIF-1α可能在一定程度能够反映CHB病人肝纤维化的严重程度。
为进一步验证HIF-1α诊断CHB肝纤维化的临床效能，本研究通过ROC曲线分析证实，血清HIF-1α诊断肝纤维化的临床效能显著，AUC高达0.947，为比较其他4种指标在诊断肝纤维化临床效能的差异，我们发现PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN对诊断肝纤维化临床效能同样显著，但HIF-1α的AUC显著高于PCⅢ、Ⅳ型胶原、透明质酸、LN（P<0.05），且诊断灵敏度和特异度分别为92.36%和95.26%，说明HIF-1α可以成为诊断CHB肝纤维化的一种新的血清学标志物。
综上所述，我们认为HIF-1α可能参与了CHB肝纤维化的发病机制，且与肝纤维化程度密切相关。血清中HIF-1α易于检测，具有操作简单、重复性强、便于动态观察等多种优势，可作为CHB病人肝纤维化治疗好转程度的指标，值得在临床上推广应用。此外，仍需要扩大样本量进一步验证我们的结果，同时开展大型队列研究探讨HIF-1α表达水平与CHB肝纤维化预后的关系，同时针对HIF-1α的靶向生物制剂也为治疗CHB肝纤维化提供新视角。
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