3种药物对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性试验
时间：2022-12-06 09:35:03 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
刘炜 周国勤 裴雪莹 茆健强 陈树桥 张雷鸣 代雅凡 石晓兰
(1 华中农业大学水产学院，湖北武汉 430070；
2 南京市水产科学研究所，江苏南京 210019)
翘嘴鲌(Culteralburnus)隶属于鲤科(Cyprinidae)、鲌亚科(Culterinae)、鲌属(Culter)[1]，俗称大白鱼。兴凯湖翘嘴鲌是其中一个特殊的地理种群，分布于我国东北黑龙江省的兴凯湖中。兴凯湖独特的地域和水域环境使其在性状上形成一个独立的地理群体[2]。兴凯湖翘嘴鲌体色银白、肉质细嫩、味道鲜美，是兴凯湖重要的名贵经济鱼类，具有极高的经济价值。兴凯湖翘嘴鲌不仅与黄河鲤(Cyrinuscarpio)、松花江鳜(Sinipercachuatai)、松江鲈(TrachidermusfasciatusHeckel)一起被列为中国“四大淡水名鱼”，还与黑龙江水域出产的大马哈鱼(Oncorhynchusketa)及绥芬河的滩头鱼(Tribolodonbrandtii)并称为“边塞三珍”[3]。近年来，由于兴凯湖自然环境变化和过度捕捞等人为因素的影响，野生翘嘴鲌产卵场屡遭破坏，人工养殖兴凯湖翘嘴鲌的比例不断升高[4]。南京秣陵生态农业有限公司和南京市水产科学研究所分别于2009年、2017年从兴凯湖翘嘴鲌良种场引进优质翘嘴鲌亲本，建立了规模化良种生产基地，目前已基本掌握兴凯湖翘嘴鲌苗种规模化繁育技术，实现了优质苗种的本地化供应。
为了配合兴凯湖翘嘴鲌养殖产业的发展，已有很多学者开展了常用药物药敏性研究以满足健康养殖需求。李琳琳等[5]测得二氧化氯、聚维酮碘、氯溴异氰尿酸对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的安全浓度分别为2.58、3.95、0.51 mg/L；
崔程等[6]测得车轮净、复合H高聚碘、特效杀虫灵和二氧化氯对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的安全浓度分别为0.000 6、8.818、0.138、0.945 mg/L；
周陆等[7]研究了南北水系翘嘴鲌群体对活性碘和阿维菌素的耐受性差异，发现北方群体对这两种药物耐受性较强。目前，国内对兴凯湖翘嘴鲌的药物毒性研究主要集中在常用水产药物急性毒性影响方面，有关烟酰苯胺、硫酸铜和扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性效应尚未见研究报道。烟酰苯胺是国内多数灭螺药物的主要成分，其杀螺效用强，且极易在土壤中残留。为避免水质污染，在一些特殊环境可采用施药加覆盖地膜的方式进行灭螺，不仅能提高灭螺效果，还可减少土壤中的药物残留。然而，有些池塘、河道因构造问题无法使用该技术或覆膜加盖时不严密，会导致烟酰苯胺泄漏污染水质，从而对养殖鱼类造成潜在风险[8-9]。硫酸铜在水产养殖生产中常被用作杀虫剂，其对鳃隐鞭虫、鱼波豆虫、斜管虫、指环虫等寄生虫引起的病害有显著的防治作用[10]。扑草净在农业生产中常常被用来清理水体中的青苔及有害藻类，其半衰期长达13个月，河床、塘底、塘埂附近残留的扑草净可通过降雨进入养殖水体，对鱼类造成危害[11]。尤其值得注意的是，兴凯湖翘嘴鲌原产于黑龙江省兴凯湖的优质水体中，对水体中的药物较为敏感[12]，因此，本研究对烟酰苯胺、硫酸铜和扑草净进行敏感性试验，以期了解这3种药物对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的毒性影响，为安全用药提供参考依据。
1.1 试验材料
兴凯湖翘嘴鲌幼鱼来自南京市水产科学研究所禄口基地，体质量为(2.88±0.34)g，全长为(7.30±0.30)cm，挑选健康无病、规格一致的个体进行试验。试验开始前，幼鱼暂养于具有生物过滤装置的循环水养殖系统玻璃缸(规格为1.4 m×1.2 m×0.45 m)中，缸内水体pH为(7.5±0.2)，水温为(28±1)℃。该循环水养殖系统有供氧、调节水温等功能。暂养期间，每天投饲两次(上午9:00，下午17:00)，暂养30 d后开始试验，试验前停饲24 h。
所有试验均在南京市水产科学研究所禄口基地进行，试验时间为2021年9—11月。
试验药物烟酰苯胺、硫酸铜和扑草净的药品规格和生产厂家等情况详见表1。
表1 试验用药基本信息
1.2 试验方法
挑选健康、规格一致的兴凯湖翘嘴鲌幼鱼用于预试验。随机将900尾幼鱼放入45个白色塑料箱(规格为38 cm×27 cm×13 cm)中，每个塑料箱放20尾鱼。每种药物试验设置5个质量浓度，每个质量浓度设3个平行组。试验开始后观察幼
鱼的存活情况并及时捞出死亡个体，避免污染水质。记录24 h内幼鱼的存活情况。
预试验结果：烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的24 h无死亡质量浓度区间为0.000 3～0.03 mg/L，全致死最小质量浓度为30 mg/L；
硫酸铜对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的24 h无死亡质量浓度区间和全致死最小质量浓度分别为0.000 45～0.045 mg/L和45 mg/L；
扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的24 h无死亡质量浓度区间和全致死最小质量浓度分别为 0.000 45～0.004 5 mg/L和4.5 mg/L。根据此结果，按等对数间距设置药物质量浓度梯度，烟酰苯胺为0.128、0.320、0.800、2.000、5.000 mg/L，硫酸铜为0.154、0.384、0.960、2.400、6.000 mg/L，扑草净为0.006、0.017、0.050、0.150、0.450 mg/L，并设置1个空白对照组，每组设3个重复。每种质量浓度的配制药液放幼鱼20尾，每24 h更换一次相同质量浓度的药液。试验过程中将死亡个体及时取出，判断幼鱼死亡以触碰后没有反应为准。试验时长为96 h，在此期间禁止投喂，记录各质量浓度组幼鱼在24、48、72、96 h时的死亡数量。
1.3 数据处理分析
利用SPSS 18.0统计软件对试验数据进行线性回归统计分析，得出24、48、72、96 h累计死亡率(y)与不同药物质量浓度(x)的线性回归方程，以及对应的半致死浓度(LC50，mg/L)和95%的置信区间。安全浓度(SC，mg/L)通过以下经验公式换算得出。
SC=96 h LC50×0.1
(1)[13]
使用SPSS 18.0软件进行差异显著性分析，用t检验计算P值，设显著性水平为0.05。试验数据以“平均值±标准差”表示。
2.1 烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性
放入烟酰苯胺溶液中的兴凯湖翘嘴鲌幼鱼短时间内未见有异常反应。随着试验时间延长，药物组幼鱼逐渐出现游动缓慢、活力下降、失去平衡等情况，部分试验鱼腹部朝上沉于水底死亡。各质量浓度组幼鱼的累计死亡情况见表2。对照组和0.128 mg/L浓度组在96 h内均没有鱼死亡；
0.320 mg/L浓度组72 h时有个别试验鱼开始死亡，96 h累计死亡率达(2.22±1.92)%；
随着试验时间延长，0.800 mg/L浓度组死亡率逐渐增加，96 h累计死亡率为(33.33±10.00)%；
2.000 mg/L和5.000 mg/L浓度组在96 h时的累计死亡率分别为(64.44±8.39)%和100%。
表2 不同质量浓度烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的累计死亡率
烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的48 h和96 h半致死浓度分别为4.041、1.257 mg/L，安全浓度为0.126 mg/L(见表3)。
表3 3种药物对兴凯湖翘嘴鲌的半致死浓度和安全浓度
2.2 硫酸铜对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性
硫酸铜各质量浓度组幼鱼的累计死亡情况见表4。随着试验时间延长，硫酸铜质量浓度越高，幼鱼死亡率越高。当硫酸铜质量浓度为0.154 mg/L时，试验鱼的96 h累计死亡率为(3.33±3.33)%；
当硫酸铜质量浓度提高到6.000 mg/L时，试验鱼的96 h累计死亡率达100%。
表4 不同质量浓度硫酸铜对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的累计死亡率
硫酸铜对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的48 h和96 h半致死浓度分别为2.116、0.984 mg/L，安全浓度为0.098 mg/L(见表3)。
2.3 扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性
扑草净各质量浓度组幼鱼的累计死亡情况见表5。由表5可见，随着试验时间延长，扑草净质量浓度越高，幼鱼死亡率越高。当扑草净质量浓度为0.006 mg/L时，48 h时有部分鱼开始死亡，死亡率为(2.22±1.92)%；
当扑草净质量浓度达到0.017 mg/L时，24 h已有幼鱼死亡，死亡率为(6.67±3.33)%；
当扑草净质量浓度为0.450 mg/L时，72 h累计死亡率达100%。
表5 不同质量浓度扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的累计死亡率
扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的48 h和96 h半致死浓度分别为0.037、0.012 mg/L，安全浓度为0.001 mg/L(见表3)。
3.1 烟酰苯胺的急性毒性试验结果
当池塘存在大量螺类时，水中溶解氧降低，养分被过度消耗，严重影响底栖动物的生存和生长，也会对养殖鱼类产生影响[14]。烟酰苯胺是一种常见的灭螺药物，分子式为C12H10N2O。烟酰苯胺可湿性粉剂最早由湖北医药工业研究所引进合成，对福寿螺(Pomaceacanaliculata)、钉螺(Oncomelaniahupensis)、田螺(CipangopaludinachinensisGray)等软体动物灭杀效果显著，且具有易溶于水、对鱼类毒性低等优点[15]。陈震平等[16]发现，烟酰苯胺的硫酸盐溶液对钉螺的24 h半致死浓度为0.3 mg/L，在1～2 mg/L质量浓度下浸泡3 d即可杀死90%的钉螺。章柳鸿等[17]发现，烟酰苯胺对珍珠蚌有较大的毒性，在0.5 mg/L质量浓度下浸泡珍珠蚌1 d，致死率为100%。尽管烟酰苯胺一般不用于养殖水体，但由于其在土壤中残留时间长，增加了养殖鱼类与其接触的风险。有研究表明，烟酰苯胺对银鲫的毒性较低，银鲫在0.75 mg/L复方烟酰苯胺溶液中的96 h死亡率为0%[18]。本研究也试图探究烟酰苯胺成为兴凯湖翘嘴鲌幼鱼养殖水体灭螺药物的可能性，但试验结果显示，兴凯湖翘嘴鲌幼鱼在2.000 mg/L质量浓度的烟酰苯胺中，96 h死亡率达(64.44±8.39)%，5.000 mg/L浓度组的96 h死亡率达100%。根据Probit法分析得出，烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌的96 h半致死浓度为1.257 mg/L，安全浓度为0.126 mg/L，低于商品常规用药浓度(0.4～1.0 mg/L)。这一结果表明，烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性较强，应避免用于对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼养殖水体的灭螺处理。此外，目前国内使用的灭螺药主要为氯硝柳胺，该药灭螺效果显著，但对鱼类胚胎发育、神经系统毒性较大[19-20]。硫酸烟酰苯胺是近年普遍使用的高效灭螺药剂，目前研究相对较少。元艺等[21]将氯硝柳胺和烟酰苯胺按照体积比1∶1进行复配，灭螺效果得到提高，对鱼的毒性相较氯硝柳胺下降50%左右。该方法为兴凯湖翘嘴鲌幼鱼养殖水体中螺类的杀灭提供了新思路。
3.2 硫酸铜的急性毒性试验结果
硫酸铜在水产养殖中常用于治疗寄生虫病，也可用于防治细菌和真菌感染。硫酸铜晶体溶解于水后，游离的铜离子能与致病微生物的菌体蛋白结合，使其变性沉淀，使细菌失去致病活力，从而达到杀菌的目的。水产养殖中常用的硫酸铜剂量为0.4～0.7 mg/L[22-23]。本研究结果显示，硫酸铜质量浓度和兴凯湖翘嘴鲌幼鱼死亡率成正比，其96 h半致死浓度和安全浓度分别为0.984、0.098 mg/L，远低于常用剂量。李燕华等[24]测得硫酸铜对攀鲈(Anabastestudineus)幼鱼的安全浓度为7.010 mg/L；
万全等[25]测得硫酸铜对黄鳝(Monopterusalbus)的安全浓度为2.1 mg/L；
周裕华等[26]测得硫酸铜对梭鲈(Sanderlucioperca)的安全浓度为0.59 mg/L。以上安全浓度值均大于本试验结果，说明兴凯湖翘嘴鲌幼鱼对硫酸铜的耐受能力较差。因此，在实际养殖生产中，应根据鱼类的种类和规格大小适当调整用药剂量，当鱼苗规格较小时应避免使用硫酸铜。
3.3 扑草净的急性毒性试验结果
池塘养殖易增加水体的氮磷负荷，进而导致水体富营养化，藻类暴发性繁殖，破坏水域生态平衡。为减少藻类过度繁殖所带来的影响，扑草净等药物常被用来清理水体中的青苔及大型水生植物等。扑草净的化学名称为2-甲硫基-4,6-双异丙氨基均三氮苯，纯品为白色结晶，在水中的溶解度为33 mg/L(25 ℃)，易溶于有机溶剂，是一种持久性甲基硫代三嗪除草剂[27-28]。扑草净主要通过抑制植物的电子传递链，阻碍光合作用以达到除草的目的，但同时会对水生动物代谢、组织器官及其体内抗氧化活性酶等产生不利影响[29-30]，因此，在养殖水体中一般不直接使用扑草净进行除草(藻)处理。但是有研究表明，由于扑草净化学性质较为稳定，在水产养殖环境中仍广泛残留，并在养殖水体中富集，危害养殖鱼类[31]。为了探究扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的毒性影响，本试验检测了扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性，结果显示，扑草净质量浓度越高，幼鱼死亡率越高，其对兴凯湖翘嘴鲌的96 h半致死浓度和安全浓度分别为0.012、0.001 mg/L，说明兴凯湖翘嘴鲌幼鱼对扑草净的耐受力较差。杨振江等[32]发现，质量浓度为400 μg/L的扑草净可显著抑制鲫(Carasstusanratus)生长，且对鲫鱼的毒性效应会间接影响水体营养盐质量浓度的变化。赵倩等[33]测得扑草净对斑马鱼(Daniorerio)的96 h半致死浓度为7.448 mg/L，显著高于本试验的0.012 mg/L，说明不同种类、不同规格的鱼对扑草净的耐受能力不同。因此，应避免扑草净污染翘嘴鲌幼鱼养殖池塘水体。
水产养殖产业迅速发展的同时，残饵(饲)、排泄物以及抗生素等药物的滥用导致养殖水域环境生态失衡。烟酰苯胺、硫酸铜和扑草净是农业生产中的常规药物，本试验初步探究了这3种药物对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的急性毒性，结果显示，烟酰苯胺对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的48 h和96 h半致死浓度分别为4.041、1.257 mg/L，安全浓度为0.126 mg/L；
硫酸铜对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的48 h和96 h半致死浓度分别为2.116 mg/L和0.984 mg/L，安全浓度为0.098 mg/L；
扑草净对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的48 h和96 h半致死浓度分别为0.037 mg/L和0.012 mg/L，安全浓度为0.001 mg/L，均低于3种药物的常规使用浓度，因此在兴凯湖翘嘴鲌幼鱼养殖水体中应谨慎使用。在实际养殖生产中，药物的毒性会受到水温、水质、用药时长、鱼的体质和规格的影响，因此应根据具体情况合理控制药物的质量浓度，并密切观察鱼的活动情况，以确保用药的安全性和有效性。
