NKD1在结直肠癌中的表达及其在预测肝转移中的价值
时间：2022-12-02 16:20:03 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
胡志方 李丹 刘燕
结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）是常见消化道恶性肿瘤，国内统计数据显示，CRC 发病率、死亡率分别位列恶性肿瘤第3 位、第5 位，且发病率逐年升高［1］。门静脉血液回流解剖学特点决定肝脏是CRC 最常见远处转移部位，据统计，50%以上CRC患者病程中会发生肝转移［2］。CRC 肝转移是临床治疗的重点与难点，也是CRC 患者主要死亡原因之一［3］。因此，探索CRC 肝转移致病机制，对其进行早期的判断和预测，成为临床研究热点。研究显示，80%左右CRC 由Wnt 通路（Wingless-related integration site，Wnt）异常活化所致［4］。裸角质膜同源蛋白（Naked cuticle homolog 1，NKD1）是经典Wnt 通路的负向调控因子，可下调Wnt 活性，抑制Wnt 信号传导，并可刺激c-JNK 发挥作用，调节Wnt/PCP 通路，进而对上皮细胞极性产生影响，调控黏附蛋白运动，控制肿瘤增值［5］。已有研究报道，NKD1 可能参与CRC 发生、发展，且与患者恶性程度及预后有关［6］。但关于NKD1 与CRC 肝转移的相关性，尚未见研究报道。本研究对此展开探讨，旨在为临床寻找预防和阻断CRC 肝转移提供依据。报道如下。
1.1 一般资料
选取2018年12月至2021年12月江苏省人民医院浦口分院接受根治性切除术的CRC 肝转移患者44 例为观察组，同期选取36 例接受根治性切除术的CRC 无肝转移患者36 例为对照组。纳入标准：均经术后病理确诊为CRC［7］；
术前均未行放、化疗。排除标准：恶性肿瘤病史；
肝脏病变经病理证实为肝良性肿瘤或原发性肝癌。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者或家属已签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 资料收集
收集患者一般资料，包括年龄、性别、肿瘤直径、病变部位、浸润深度、Duke 分期［8］、分化程度（低分化、中分化、高分化）、有无淋巴结转移等。
1.2.2 癌组织及癌旁组织NKD1 检测
取癌组织及癌旁组织标本，10%中性福尔马林中浸泡，石蜡包埋，连续切片（4 μm 厚），分别行苏木素-伊红（HE）和免疫组化染色。美国Santa Cruz 公司1∶50 兔抗人NKDl 多克隆抗体；
北京中杉金桥公司。DAB 酶底物显色试剂盒、即用型SP 免疫组化试剂盒。按说明书进行免疫组化染色，阳性对照由试剂公司提供，阴性对照以磷酸盐缓冲溶液代替一抗。结果判读［8］：NKDl 阳性：胞质着色，为棕黄色至棕褐色粗颗粒状。由阳性细胞百分率与着色强度分别进行评分。阳性细胞百分率［9］：×400 镜下随机取5 个不同视野，无阳性细胞、阳性细胞数≤10%、阳性细胞数11%～50%、阳性细胞数51%～75%、阳性细胞数＞75%分别计0、1、2、3、4 分；
着色强度：无着色、淡棕色、棕黄色、棕褐色分别计0、1、2、3 分。两项得分相乘，3 分以上为阳性。
1.3 统计学处理
采用统计学软件SPSS 22.0 处理数据，计量资料以（±s）描述，t检验；
计数资料用n（%）表示，χ2检验；
影响因素采用Logistic 回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
2.1 癌组织及癌旁组织NKD1 表达率比较
癌组织NKD1 阳性表达率（28/80），癌旁组织NKD1 阳性表达率（65/80）。癌组织NKD1 阳性表达率低于癌旁组织，差异有统计学意义（χ2=35.153，P＜0.001）。见图1。
图1 NKDl 表达病理图（IHC，×20）Figure 1 NKD1 expression in cancer tissue（IHC，×20）
2.2 癌组织NKD1 表达与病理特征的相关性
CRC 患者癌组织中NKDl 阳性表达率与年龄、性别、肿瘤直径、病变部位、浸润深度比较差异无统计学意义（P＞0.05）。与Duke 分期、分化程度、淋巴结转移比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。
表1 癌组织NKD1 表达与病理特征的相关性［n（%）］Table 1 Correlation between NKD1 expression and pathological features in cancer tissues［n（%）］
2.3 CRC 肝转移的单因素分析
80 例CRC 患者，肝脏病变经病理证实为肝转移44 例，发生率55.00%（44/80）。浸润深度、Duke分期、分化程度、淋巴结转移及癌组织NKD1 表达均为CRC 肝转移相关因素（P＜0.05）。见表2。
表2 CRC 肝转移的单因素分析［n（%）］Table 2 Univariate analysis of CRC liver metastases［n（%）］
2.4 CRC 肝转移的多因素Logistic 回归分析
以CRC 患者肝转移情况为因变量（赋值：无肝转移=0，肝转移=1），将表2中差异有统计学意义的项作为自变量（赋值：浸润深度：无浸润浆膜=0，浸润浆膜=1；
Duke 分期：A+B=1，C+D=2；
分化程度：高+中=1，低=2；
淋巴结转移：无=0，有=1；
癌组织NKD1 表达：阴性=0，阳性=1），应用Logistic 回归模型分析，结果显示，浸润浆膜、Duke 分期C+D期、低分化、淋巴结转移均为CRC 患者肝转移独立危险因素，癌组织NKD1 阳性表达为CRC 患者肝转移独立保护因素（P＜0.05）。见表3。
表3 CRC 肝转移的多因素Logistic 回归分析Table 3 Multivariate logistic regression analysis of CRC liver metastases
研究表明，未经治疗的CRC 肝转移患者中位生存期仅6～9 个月，是CRC 最主要死亡原因［10］。CRC 肝转移具有明显遗传分子异质性，是术后复发重要因素，也是个体化治疗重要依据［11］。因此，早期评估CRC 肝转移情况具有重要临床意义。
随遗传学和表观遗传学逐步累积，CRC 发生关键在于Wnt 通路异常激活［12］。NKD1 最初在果蝇体内发现，包含470 个氨基酸，是Wnt 通路重要调节蛋白之一。多项研究显示，CRC 患者癌组织中NKD1 表达能力减弱，且与肿瘤分化能力、转移及预后有关［13］。本研究显示，CRC 患者癌组织中NKDl阳性表达率显著低于癌旁组织，且与Duke 分期、分化程度、淋巴结转移有关，亦提示NKDl 低表达可能参与CRC 发生及侵袭、转移，与上述报道一致。NKD1 主要通过抑制经典Wnt/β-环蛋白（β-Catenin）通路而发挥功能，主要机制在于：NKD1 保守EF 序列结合散乱蛋白家族Dvl 蛋白，进而引起细胞核内β-catenin 异常表达［14］。同时，NKD1 对Wnt/PCP 信号通路具有调节作用，进而影响上皮细胞极性，调控黏附蛋白，最终抑制肿瘤增殖［15］。
CRC 肝转移与解剖相关，这是由于肿瘤经肠系膜静脉向门静脉回流，进而引起癌细胞转移至肝脏［16］。本研究中，80 例CRC 患者，发生肝转移44 例，发生率高达55.00%（44/80），与报道［17］一致。目前，CRC 肝转移确切机制尚未完全明确。研究报道，CRC 肝转移中环加氧酶-2 mRNA、血管重塑因子血管生成素-2、转化生长因子-α、表皮生长因子受体等表达上调［18］。相应肿瘤抑制基因可能作为肝转移监测的重要标志。目前，已有研究评估NKDl 在CRC 患者的诊断、预后评价中的作用，然而其对肝转移的预测价值尚不明确。本研究显示，肝转移者癌组织NKD1 阳性表达率15.91%（7/44）显著低于无肝转移者58.33%（21/36），且Logistic 回归模型分析显示，癌组织NKD1阳性表达为CRC 患者肝转移独立保护因素。表明NKD1 对CRC 肝转移具有一定预测价值。上皮间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）指间叶细胞标记物如波形蛋白、神经性钙黏素表达增加，上皮细胞标记物如上皮性钙黏素表达降低，形成的间叶样细胞的侵袭力显著提升，促进肿瘤细胞转移［19］。研究显示，EMT 在CRC 肝转移中发挥关键作用，涉及多种信号通路，其中经典Wnt/β-Catenin 通路对癌细胞EMT 具有明显促进作用［20］。因此，推测NKD1 通过抑制细胞核内βcatenin 表达，阻断EMT，进而抑制CRC 肝转移。另研究指出，局部持续慢性炎性反应可加速肿瘤生长、浸润，为CRC 肝转移提供条件［21］。而Wnt/β-Catenin 通路在炎症反应、肿瘤形成等过程中发挥关键作用，也可能是NKD1 抑制CRC 肝转移的机制之一。因此，对CRC 肝转移进行预测时，检测NKDl 阳性表达率具有重要指导意义。但NKD1参与CRC 肝转移的确切机制仍有待基础研究进一步明确。
综上可知，CRC 患者NKDl 阳性表达率显著降低，可能与CRC 侵袭与转移有关，且可作为肝转移的预测标志物。
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