液相色谱-串联四极杆质谱法测定牛奶中128种农药残留
时间：2021-02-08 08:00:11 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
摘 要 目的：采用液相色谱-串联四极杆质谱法测定牛奶中128种农药残留。方法：将乙腈20ml加入到牛奶10ml中， 振荡提取两次，上清液浓缩后经C18固相萃取柱净化将干扰杂质去除，洗脱液浓缩到4.5m后放置在45摄氏度下采用氮气将其吹干，然后加入1ml乙腈-水进行定容，进行为期30秒的超时溶解，过滤时采用0.2um微孔滤膜。结果：在三次平行实验中农药品种（80%）的平均回收率均超过70%。结论：这种方面在测定农药残留方面应用价值高，具有很强的通用性、较高的灵敏度和良好的选择性。
关键词 液相色谱-串联四极杆质谱法；牛奶；农药残留
牛奶中残留农药的途径有很多，如动物、直接驱杀害虫等。奶牛在食物营养链中的等级比较高，相应的会提高农药残留量。目前，奶及其制品富含营养，与完善的健康食品日十分接近，深受广大消费者的欢迎。同时，各国越来越重视牛奶中的农药残留，如法国Bordet、意大利的Alfonso。但是，国内研究仍然停留在对一类品种的检测方面，关于不同种类同时测定的报道少之又少。
1 实验部分
1.1 试剂
从奶牛饲养场中直接取牛奶，没有经过任何的加工处理。
1.2 方法
1.2.1 配制标准溶液
称取农药各标准物5到10mg，在10ml的容量瓶中分别放置，按照其本身的溶解度来选择相应的物品进行溶解，然后定容到刻度。
以农药保留时间、相关化学性质为依据，将128种农药分为两组，即A组、B组，按照仪器中每种农药的相应灵敏度，将其混合标准溶液中的浓度确定下来。
以每种农药的分组、混合标准溶液和储备液的浓度为依据，称取一定量单个农药的标准储备溶液，并在100ml的容量瓶中放置，定容时采用甲醇至刻度[1]。
1.2.2 配制基质混合标准工作溶液
该方法LOD（检出限）的确定，依据标准为信噪比大于等于5时的添加浓度。农药基质采用样品空白溶液可以配置出添加浓度不同的混合标准工作溶液，即1LOD、2LOD、5LOD、8LOD、12LOD，本着现用现配的原则，这些主要用来完成对标准工作曲线的绘制。
1.2.3 处理样品
在50ml离心管中放置10ml牛奶，依次加入乙腈20ml、硫酸镁4g和氯化钠1g，放置在振动器中进行为期10分钟的剧烈振荡，然后在每分钟4200r的速度下进行为期8分钟的离心处理，在100ml的鸡心瓶中完成对上清液的收集，然后采用20ml的乙腈对残夜进行重复提取。将两侧提取液合并起来，在40摄氏度的水浴中放置并进行旋转蒸发一直剩大约1ml为止。采用乙腈10ml对ENVITM-18固相萃取柱进行活化，提取液经浓缩后需要向该柱中转移，样品瓶的洗涤需要借助5ml乙腈，同样在固相萃取柱中并入洗涤液，如此重复性操作两次。在100ml的鸡心瓶中将流出液收集起来，固相萃取柱的洗脱借助10ml乙腈，然后合并流出液，蒸发旋转至0.5ml（在40摄氏度的水浴中），然后用氮气在45摄氏度的条件下吹干，定容时加入乙腈-水1ml，进行30秒的超声溶解，过滤时借助0.2um的微孔滤膜，采用LC-MS/MS进行科学测定[2]。
同时，选取没有农药的牛奶样品，根据上述操作完成对样品空白提取液的制备。
2 结果与讨论
2.1 优化实验方法
通过深入研究国内外有关文献法，本文共设计不同的实验方案四种，如采用2乘以20ml正己烷-丙酮对10ml的牛奶进行两次振荡提取，将上层有机相合并，然后旋转蒸发至1ml，采用2乘以5ml的乙酸乙酯-环己烷进行交换，采用GPC净化，旋转蒸发流出液至0.5ml，吹干时借助氮气，之后采用乙腈-水对残余物进行溶解定容，测定时采用LC-MS/MS）、超声波提取、均质提取。其中本文采取的方法为液相色谱-串联四极桿质谱法，其具有显著优势，不仅农药品种多且能够取得良好的净化效果，在三次平行实验中农药品种（80%）的平均回收率均超过70%[3]。
同时，对实验本文所采取的实验方案进行了有效的改进：通过提取溶剂体积的增加，可以使提取更加充分；同时将全部的上清液收集起来进行净化，可以保证实验操作的合理性与代表性；最后采用C18固相萃取柱，可以简化净c化过程，提高操作性。
2.2 优化提取方式
本文在液相色谱-串联四极杆质谱法的基础上对其他三种提取方式进行了科学的比较，结果发现三种方式在农药的添加回收率数据方面 ，差距不显著，处于对牛奶独特性质的考虑和实验室自身条件的结合，本文最终将振动提取的方式确定下来，效果非常理想[4]。
早提取溶剂、方式和步骤均确定的基础上，对不同提取次数对农药添加回收率的影响进行了科学的分析与对比，得知：每次振动提取时采用20ml乙腈，2次回收率高于1次，大约高5～20%，3次则没有显著增加，在确保能够取得良好添加回收率的基础上，站在节省试剂与时间的角度上，建议采用乙腈进行2次振荡提取。
3 结语
本文关于牛奶样品中128中农药残留量的测定，采取乙腈提取、SPE柱净化、液相色谱-串联质谱法的方法，凭借其简便的操作和超高的灵敏度，可以广泛的应用到日常检测中去。
参考文献：
[1]郭春景，王建忠，郝晓莉.利用QuEChERS法测定甘蓝、草莓中7种农药残留的实验条件优化探索[J].质谱学报，2013，02（34）：121-127.
[2]M Mezcua，A Agüera，JL Lliberia，MA Cortés，B Bagó. Application of ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry to the analysis o f p r i o r i t y p e s t i c i d e s i n groundwater[J].E.Flammarion，2006，1109（02）：222-7.
[3] 林维宣，孙兴权，田苗，等.动物组织中粘杆菌素、杆菌肽及维吉尼霉素残留量的液相色谱——串联质谱[J].分析测试学报，2009，22（02）：212-215.
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