322例蛋白芯片法和抗酸染色法诊断结核病的比较_结核病抗酸染色阳性

时间：2020-03-16 08:28:18　来源：雅意学习网本文已影响人

　　[摘要] 目的对蛋白芯片法和抗酸染色法诊断结核病的探讨。方法通过对我院诊断为肺结核的住院患者322例血清标本和取他们当日的痰标本进行抗酸菌涂片染色镜检进行比较。结果结核分枝杆菌蛋白芯片法的阳性检出率为58.4%，抗酸菌涂片染色法的阳性检出率为25.5%。可见蛋白芯片法阳性检出率明显高于抗酸菌涂片的阳性检出率。结论结核分枝杆菌蛋白芯片法诊断结核病，具有简便快速敏感性较高特异性较强等优点，是临床辅助诊断结核病先进和有效的方法。
　　[关键词] 分枝杆菌；结核；蛋白芯片；诊断
　　[中图分类号] R52 [文献标识码] A [文章编号] 1005-0515（2011）-12-239-01
　　结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病。全身各器官均可发生，但以肺结核最为多见。其病变特征是结核结节形成并伴有不同程度的干酪样坏死。结核病是一个严重威胁人类健康的疾病。全球现有活动性肺结核病人约2000万，其中95%在发展中国家。我国是世界上22个结核病高负担国家之一，患者人数居全球第二位。
　　早期结核病患者往往仅有低热、乏力、消瘦等一般性症状，特别是目前发病率越来越高的肺外结核，如肝结核、胰结核、肾结核、腹膜结核、骨结核等等，使传统的结核病诊断手段例如X-光检查、痰液微生物学检查等变得苍白无力，使大量结核病患者未能被及时诊断而延误了治疗时机，这是目前结核病死亡率急剧增高的重要原因。因此对临床上不明原因发热(热待查)或不明原因消耗性症状患者应警惕肺外结核的可能。常规地对上述就诊者群体进行结核抗体血清学检测，将能及时有效地检出这些患者，使他们及早得到治疗，是广大医务人员和结核病患者的迫切需求。
　　目前肺结核经典的诊断方法主要有：痰涂片、培养法、皮试法，有的时间长、有的检出率低，因此WHO要求世界各国进一步开发新的体外诊断方法。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 标本来源 322例确诊为肺结核的患者血清和痰标本均来自于我院内科(肺结核科)疗区，男184例，女138例，年龄11-82岁间。
　　1.1.2 主要仪器和试剂蛋白芯片检测仪、结核分枝杆菌蛋白芯片试剂盒均来自于南京大渊生物技术公司。
　　1.2 方法
　　1.2.1 抗酸菌涂片染色镜检法 ①染色方法：涂片自然干燥后放在染色架上；滴加石碳酸复红染液，盖满痰膜，火焰加热至出现蒸汽后，脱离火焰，保持5分钟，染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染液，加温时勿使染液沸腾；用流水冲去染色液，沥去标本上剩余的水；自痰膜上端外缘滴加脱色剂布满痰膜，脱色3min，如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止；流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去玻片上剩余的水；滴加亚甲蓝复染液，染色30s；流水自玻片一端轻缓冲洗冲去复染液，沥去玻片上剩余的水，待玻片干后镜检。②把通过抗酸菌染色后的玻片放在100×油镜下观察，结果报告标准如下：镜检100个事业内找到抗酸杆菌3-9条者，报告抗酸杆菌阳性(1+)；镜检10个视野内找到抗酸杆菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性(2+)；镜检每个视野内找到抗酸杆菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性(3+)；镜检每个视野内找到抗酸杆菌多于9条以上者，报告抗酸杆菌阳性(4+)；镜检300个视野未发现抗酸杆菌者，报告抗酸杆菌阴性(-)。
　　1.2.2 蛋白芯片法
　　1.2.2.1 检测原理结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(蛋白芯片)由芯片和试剂两部分组成。芯片以微孔滤膜为载体，同时将结核菌的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM和经基因工程重组DNA技术生产纯化的结核菌16kD和38kD特异性抗原固定在特制的载体上，利用微孔滤膜的浓缩、凝集、渗滤作用，捕捉被检样品中特异性抗体，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，复合物再与胶体金标记的抗人IgG作用，在膜上形成紫红色的斑点。最后通过生物芯片识别仪进行结果分析。本品分别测定抗结核菌的特异性细胞壁脂多糖LAM抗体、16kD抗体和38kD抗体，如一种抗体阳性，则判断该患者抗结核分枝杆菌抗体阳性。判定结果用于结核菌感染的临床辅助诊断。
　　1.2.2.2 标本要求静脉血清，体积不少于150μl；溶血样本和高脂血样本不宜；新鲜血样在2℃-8℃环境下存放不要超过48小时；长期保存的样本应在-20℃以下冻存，避免反复冻融。
　　1.2.2.3 检验方法 ①在芯片上标记好样品编号。②在芯片盒窗口内滴加200μl试剂A，使膜表面完全浸湿。③待完全渗入后，室温放置一分钟，加待检血清100μl。④待血清完全渗入后，及时滴加300μl试剂B。⑤待试剂B完全渗入后，滴加500μl试剂C。⑥待试剂C完全渗入后，最后滴加300μl试剂D。⑦反应完毕后，把芯片盒内的小光盘放入光驱，检测仪会自动进入“生物芯片检测软件”，然后按程序进行操作，由仪器打印出分析结果。
　　结核分枝杆菌蛋白芯片法试剂盒检测抗酸杆菌三种特异性抗体，即抗脂阿拉伯甘露醇(LAM)，16KDa及38KDa抗体。如果有一种抗体检测结果为阳性，则结果可判定为阳性；如果三种抗体检测结果均为阴性，则结果判定为阴性。整个检测过程不超过30min。
　　2 结果 1)抗酸涂片染色检测322例中，检测出抗酸杆菌阳性者为82例，其阳性检出率为25.5%，其中男性有208人，女性为114人。(1+)的有27人，占总阳性率的27/82为32.9%；(2+)的有39人，占总阳性率的39/82为47.6%；(3+-4+)的有16人，占总阳性率的16/82为19.5%。2)结核分枝杆菌蛋白芯片法，检测322例：检测出阳性者为188例，占总的阳性检出率的188/322为58.4%。以上三种结核菌抗原的抗体阳性率以抗LAM抗体的阳性率为最高162/188为86%，38KDa为130/188为69.1%，16KDa为40/188为21.3%，LAM、38KDa、16KDa均为阳性占18/188为9.6%。
　　3 讨论结核蛋白芯片是利用结核菌的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM和经基因工程重组DNA技术生产纯化的38KDa及16KDa特异性抗原固相于同一膜片上，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物在膜上显色用于结核病的临床检测。
　　 LAM是分支杆菌属细胞壁的重要组成部分，属特异性抗原，具有较强的免疫原性，其检测的灵敏度较高，但除结核分枝杆菌外，其它分支杆菌也有LAM成分，因此其特异性相对较低。结核分枝杆菌的38KDa抗原和16KDa抗原是结核分枝杆菌所特有的抗原，它与其它非结核分枝杆菌不存在交叉反应，它诊断的特异性较高，而灵敏度较低。从以上结果可以看出，结核分枝杆菌蛋白芯片法检测结核的灵敏度为58.4%，较抗酸菌涂片法25.5%的灵敏度高一倍以上。
　　在结核病的临床诊断方法中，抗酸染色结果具有简便、快速、特异性高的优点，是目前最主要的结核确诊手段。但其阳性率较低，大约在25-35%，存在着65-75%涂片阴性或培养阴性可疑结核病的诊断问题，从结果可见，结核分枝杆菌蛋白芯片法阳性检出率为58.4%，显著高于抗酸菌镜检法25.5%，这表明蛋白芯片法结核抗体的检测对于不排痰的结核患者涂片镜检阴性的结核病人有重要意义，能显著提高检测灵敏度，使结核病患者早日诊断。
　　综上所述，结核分枝杆菌蛋白芯片法诊断结核病较抗酸染色法而言，具有简便、快速、敏感性高的优点，是临床辅助诊断结核病的又一种有效法，值得临床推广。

322例蛋白芯片法和抗酸染色法诊断结核病的比较_结核病抗酸染色阳性

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