miR-26b与血小板P选择素(CD62p)在脑梗死患者血清中的表达及临床意义
时间：2023-06-29 20:10:03 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
裴雯雯, 逯 琴, 王 瑞, 张文敏
急性脑梗死是一种因大脑供血受阻而引起的严重脑损伤疾病,起病急骤,并会在短时间内出现症状,临床上多数患者有耳鸣、头痛、口齿不清、呕吐等表现,损害神经功能,预后较差[1,2]。由于神经元的不可再生性,脑梗死的致残率和复发率均较高,给家庭和社会带来负担[3]。血小板活化引起血管栓塞,造成局部供血缺失是脑梗死形成的根本原因[4]。因此,及早检测脑梗死,以恢复脑供血,减缓脑细胞损伤,从而改善患者临床结局。微小RNA(miRNA)通过其靶蛋白调控和影响心血管疾病、脑梗死、神经退行性疾病、癌症等的发生、发展,其可以简便从血液等分离出,且侵袭性低[5]。据报道,miR-26b是一种缺氧调节的miRNA,在缺氧环境下表达下调,miR-26b对血小板激活、血管再生、神经元有调节作用[6,7]。研究显示,巨核细胞和血小板miR-26b下调有助于脓毒症中血小板活化状态水平的升高[8]。CD62p是血小板表面的糖蛋白,可以反映血小板活化水平,能够促进血栓形成,推动脑梗死进展[9]。因而CD62p在脑梗死中的作用引起重视,监测CD62p对量化血小板功能及脑梗死治疗有重要价值。基于此,本研究旨在分析miR-26b、CD62p表达水平与脑梗死病情和预后关系。
1.1 研究对象 选取本院2019年6月-2021年12月收治的急性脑梗死患者128例作为病例组,诊断参照《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[10],经临床头部CT或MRI确诊。其中年龄38～78(58.62±10.05)岁,男71例,女57例,BMI为(23.50±2.83)kg/m2。另以本院健康体检者128例作为健康组,年龄38～77(58.14±9.37)岁,男75例,女53例,BMI为(23.18±2.95)kg/m2,与病例组具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。纳入标准：(1)发病后24 h内就诊;(2)心肺肝肾功能健全;(3)初次发病;(4)无胃肠道溃疡;(5)非过敏体质。排除标准：(1)脑出血、颅内感染、蛛网膜下腔出血等其他颅内器质性疾病;(2)血液系统疾病;(3)急、慢性感染;(4)近期胃出血;(5)近期抗凝、抗血小板聚集、溶栓等治疗。采用NIHSS评分评定病例组入院时神经功能：轻度为39例(≤4分),中度62例(5～15分),重度27例(≥16分)[11]。根据头部CT计算脑梗死体积其中小梗死为31例(<5 cm3),中梗死62例(5～10 cm3),大梗死35例(>10 cm3)[12]。改良Rankin量表评定病例组患者发病后3个月预后情况：预后良好80例(≤2分),预后不良48例(>2分)[12]。
1.2 血清miR-26b与CD62p表达水平检测 于发病24 h内抽取空腹>8 h肘静脉血,离心后得血清,采用上海纪宁生物公司的ELISA试剂盒(JN17903)检测血清CD62p,按照说明书操作。采用YEASEN公司的血清miRNA提取试剂盒(货号：19332ES08)获得RNA;采用新海基因公司的一步法miRNA反转录试剂盒(货号：D1801)得到cDNA产物,然后利用Mix-X miRNA qRT-PCR TB Green Kit(货号：638314,Takara公司)配制反应体系,并在QuantStudio 12K Flex(ABI公司)实时荧光定量PCR系统上采集信号。引物序列(见表1)。
表1 引物序列
2.1 两组血清miR-26b与CD62p表达水平比较 通过比较病例组与健康组血清miR-26b、CD62p表达水平发现,病例组miR-26b表达水平显著低于健康组,而CD62p表达水平显著高于健康组(P<0.05)(见表2)。
表2 两组患者血清miR-26b、CD62p表达水平比较
2.2 miR-26b、CD62p与NIHSS评分、脑梗死体积及mRS评分相关性 相关性分析显示,病例组血清miR-26b与NIHSS评分、脑梗死体积及mRS评分均存在负相关(P<0.05);CD62p与NIHSS评分、脑梗死体积及mRS评分分别存在正相关(P<0.05)(见表3)。
表3 miR-26b与CD62p与NIHSS评分、脑梗死体积及mRS评分相关性
2.3 miR-26b与CD62p表达水平与病例组临床病理参数的关系 通过比较miR-26b与CD62p表达水平与急性脑梗死患者临床病理参数的关系发现,轻度、中度、重度神经功能缺损者血清miR-26b表达水平逐次降低,CD62p表达水平逐次上升;血清miR-26b表达水平随梗死体积增加而降低,CD62p表达水平随梗死体积增加而上升(P<0.05);预后不良者miR-26b表达水平低于预后良好者,而CD62p表达水平高于预后良好者(P<0.05)(见表4)。
表4 miR-26b与CD62p表达水平与病例组临床病理参数的关系
2.4 影响预后不良的危险因素 以本研究资料为样本,以预后不良为因变量,将NIHSS评分、年龄、脑梗死体积、miR-26b、CD62p为自变量,建立Logistic回归模型。由结果可知,NIHSS评分及脑梗死体积增加、miR-26b低表达、CD62p高表达是急性脑梗死患者发病后3个月发生预后不良的危险因素(P<0.05)(见表5),采用2-ΔΔCt法计算miR-26b表达水平。
表5 影响急性脑梗死患者预后不良的危险因素分析
2.5 miR-26b与CD62p表达水平诊断预后不良的ROC曲线 ROC分析显示,miR-26b诊断急性脑梗死预后不良的曲线下面积为0.856(95%CI0.791～0.921),敏感度为77.10%,特异性为78.70%,最佳截断值取0.69;CD62p诊断预后不良的曲线下面积为0.876(95%CI0.815～0.937),特异性为78.70%,敏感度为81.30%,截断值为9.79 ng/ml。miR-26b联合CD62p预测预后不良的曲线下面积为0.950(95%CI0.916～0.984),敏感度为87.50%,特异性为91.20%(见图1)。
图1 miR-26b与CD62p表达水平诊断预后不良的ROC曲线
急性脑梗死具有高死亡率、高发病率及高复发率,受环境危险因素和遗传因素影响。该病主要是由于大脑血液循环异常,导致大脑出现缺血缺氧,立即发生大规模神经细胞死亡[13]。急性脑梗死起病急、进展快、预后差,易出现偏瘫、语言障碍等后遗症[2]。据报道,我国脑梗死患者发病1个月、3个月病死率分别为2.3%～3.25%、9%～9.6%[3]。目前,脑梗死的诊断主要依赖于神经影像学技术,如CT、MRI,然而这种设备较为昂贵,需要专业人员操作和分析结果,导致推广受限[2]。临床缺乏快速有效急性脑梗死诊断标志物,血液样本是检测脑梗死和康复效果最容易获得的材料。因此,积极寻找能够预测疾病严重程度和预后的特异性标志物有重要意义。
既往研究证实,miRNA的异常表达能够显著调节氧化应激、细胞毒性、炎症、神经元凋亡和血管生成等,被认为是改善卒中预后的前瞻性治疗靶点[14]。例如,有研究发现miR-124在急性脑梗死患者血清中低表达,且与不良预后呈正相关[5]。miR-488-3p通过降低液泡分选蛋白4B水平对神经保护功能发挥关键作用[14]。以上研究说明,miRNA在脑梗死中扮演重要角色。据报道,miR-26b的下调表达导致血小板活性增加,其低表达与脓毒症严重程度和死亡率相关[8]。miR-26b是否通过调节血小板活性参与急性脑梗死,故而本研究检测了miR-26b在急性脑梗死中表达变化,病例组miR-26b表达水平降低,说明miR-26b参与急性脑梗死发生。另有关心肌梗死的研究显示,miR-26b通过与环加氧酶2结合抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,减轻小鼠模型的炎症反应和心肌重构[6]。过表达miR-26b可以减轻大鼠海马CA1区域损伤,抑制小胶质细胞活化,阻止炎性因子产生,减少神经元凋亡,从而减轻认知障碍[15]。本研究进一步分析miR-26b对患者临床病理参数关系,发现神经功能缺失程度越轻、脑梗死体积小,预后良好者miR-26b表达水平越高,提示miR-26b低表达可能通过增加血小板活化状态、促进炎症反应,促进血栓形成,加重神经损伤,导致患者预后较差。相关性显示,miR-26b与NIHSS评分、mRS评分及梗死体积呈负相关,说明miR-26b与急性脑梗死患者的脑梗死体积、神经功能及预后有关,监测血清miR-26b表达变化能够反映病情及预测预后。回归分析显示,miR-26b低表达是预后不良的影响因素,证明miR-26b表达水平越低,患者预后不良风险增加。近期,李晓峰等[7]有关老年脑卒中研究发现miR-26b与脑源性神经细胞营养因子(BDNF)呈负相关,可作为预测抑郁的辅助指标。miR-26b预测急性脑梗死患者预后不良的曲线下面积为0.856,敏感度为77.10%,特异性为78.70%,说明miR-26b预测临床预后效能良好。
CD62p是一种糖蛋白,分布于静止血小板的α粒子上,当血小板被激活,α粒子迅速与血小板膜融合并释放,使CD62p暴露于血小板质膜表面,在血小板活化后10 min其表达水平达到峰值[4]。因而,CD62p是广泛认可的血小板活化特征标志物,可用于检测血栓性疾病,并是抗血栓形成和抗炎药物的新的治疗靶点[16]。研究显示,CD62p参与了急性脑梗死过程,不仅能够启动、放大血栓,还通过加重炎症反应影响脑组织损伤过程,促进脑血流灌注异常[17]。Xu等[4]结果显示,CD62p在急性脑梗死中上调表达,且已经证实与梗死严重程度和短期预后有关。然而将CD62p作为血清学指标应用于临床急性脑梗死诊断仍需要大量研究。
本次结果发现,CD62p在病例组中表达水平上升,提示CD62p参与发病过程。本研究轻、中、重度神经功能受损者血清CD62p表达水平逐次上升,且与NIHSS评分呈正相关,提示CD62p能够用作血清指标评估急性脑梗死患者病情严重情况。同时,CD62p表达水平随梗死体积增加而上升,与梗死体积存在正相关,提示CD62p的高表达能够放大血栓、促进炎性因子分泌增加,导致脑组织坏死范围扩大,引起梗死体积增加[18]。虞冬晴等[19]通过研究发现,急性缺血性脑梗死患者血清CD62p表达水平增加,死亡患者、预后不良者CD62p表达水平高于存活者及预后良好者,说明CD62p与预后有关。为了充分明确CD62p与急性脑梗死患者预后的关系,本研究对病例组患者发病后3个月进行mRS评分,通过分析发现预后不良患者CD62p表达水平明显上升,且CD62p表达水平上升是预后不良的影响因素,说明血清CD62p表达水平上升可能通过加重患者神经功能受损程度,扩大脑梗死体积,进而导致预后不良。鉴于CD62p与脑梗死的预后密切相关,本研究分析了CD62p预测预后不良的效能,曲线下面积为0.876,但敏感度和特异性不高。故而将miR-26b联合CD62p预测,发现曲线下面积为0.950,说明miR-26b联合CD62p预测急性脑梗死短期预后有一定指导价值。
综上,血清miR-26b、CD62p异常表达均与急性脑梗死神经功能缺损程度、梗死体积和临床预后有关,二者联合有助于提高对急性脑梗死临床预后预测价值。但局限性为随访时间短,miR-26b与CD62p在急性脑梗死中具体调控机制仍需进一步实验验证和探究。
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