脾脏体积变化及血清炎性因子对急性脑梗死严重程度的预测价值
时间：2023-06-09 08:50:40 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
汪步玲， 张 骏， 关闪闪， 郭云云， 王 训
越来越多的证据表明，急性脑梗死(acute ischemic stroke，AIS)与免疫系统相关。美国斯坦福大学一项荟萃分析显示：免疫系统在AIS的病理生理学中起着双重作用。一方面，免疫系统影响着脑梗死的发生、发展及转归；
另一方面，脑梗死作为应激事件，通过下丘脑-垂体-肾上腺轴、交感神经及副交感神经系统对免疫系统进行调控[1]，故免疫系统的相关指标在AIS早期神经功能缺损方面可能有较好的应用前景。
血清炎性因子作为细胞间免疫反应的媒介，是AIS病程中不可或缺的角色，但在目前的研究中血清炎性因子对AIS严重程度的预测价值涉及的种类较少[2]。此外，Han等人认为，脑梗死后脾脏释放大量免疫细胞和细胞因子通过体液循环进入梗死部位，导致自身体积缩小，且Preeti等人发现脾脏体积变化与美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分之间存在一定相关性[3,4]，故脾脏体积变化对AIS严重程度可能存在预测价值。本研究将利用脾脏体积变化及血清炎性因子对AIS严重程度的预测价值进行探讨。
1.1 研究对象 选取2022年1月-2022年6月安徽医科大学第二附属医院神经内科发病24 h内的AIS患者作为研究对象。纳入标准：符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南 2020》中的AIS诊断标准；
年龄≥18 岁；
患者或其家属知情同意，并签署知情同意书；
均按照神经内科疾病诊疗指南(第3版)规范治疗。排除标准：伴有癫痫或急性心肌梗死患者；
伴有自身免疫疾病或血液疾病患者；
长期服用免疫抑制剂患者；
伴有泌尿系统、肺部感染患者；
伴有心、肺、肝脾疾病及不能配合完成各项检查患者。根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分，将入组患者参照文献[5]分为NIHSS<6分的轻度组及NIHSS≥6分的中重度组，其中轻度组30例，中重度组32例。本研究于2022年5月10日通过安徽医科大学第二附属医院医学研究伦理委员会审核批准(YX2022-059)。
1.2 脾脏体积测量 采集入组患者发病24 h内及发病48 h脾脏超声，两次超声间隔时间为(24±6) h。采集方法参照文献[6]，使用超声台机测量脾脏体积，即患者平卧休息10 min，然后取右侧卧位，探头平行肋间隙，二维声像图上清晰显示脾脏，调整探头至脾门切面，测量脾脏长径(a)和厚径(b)；
最后转动探头垂直于肋间隙，测宽径(c)(见图1)。脾脏体积利用公式(V)=a·b·c·π/6计算。采集后处理由1名经验丰富超声科医师进行审核，并计算脾脏体积标准化差值，计算方法：(发病24 h内脾脏体积-发病48 h脾脏体积)/发病24 h内脾脏体积。产品参数：Mindray超声台机UMT-500，产地为深圳，生产企业为深圳迈瑞生物医疗电子股份有限。本研究脾脏超声采集均由同一位医师完成。
图1 脾脏超声示意图
1.3 指标及收集 在本研究中，所有NIHSS评分均在AIS发病24 h内由床位医师评估后，再由2名经验丰富的神经内科医师进行复核；
所有数据由两名研究人员收集并录入系统，再由一名与本研究无关人员对录入结果进行核对；
其一般临床资料包括性别、年龄、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、房颤史、 发病24 h内白细胞绝对值、中性粒细胞绝对值、单核细胞绝对值以及淋巴细胞绝对值。
发病24 h内血清炎性因子测定，检测流程为采集患者肘静脉血5 ml，离心后配制洗涤缓冲液,稀释样本，采用流式细胞仪检测，样本检测完毕后导出以细胞因子浓度、血清炎性因子种类分别为横、纵坐标的二维散点图。共检测血清炎性因子12项，包括白细胞介素5(interleukin-5,IL-5)、白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素12P70(interleukin-12P70,IL-12P70)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、α-干扰素(interferon-α,IFN-α)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。该12项炎性因子检测试剂盒(多重微球流式免疫荧光发光法)和炎性因子校准品购自青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司。仪器设备为仪器流式细胞仪(深圳迈瑞，型号BriCyte E6，荧光激发光波长为488 nm和638 nm)；
快速混匀器(江苏，型号XK96-B)；
冷冻离心机(德国，型号CRYOFUGE)；
电热恒温水浴箱(上海，型号HH.W21.600S)。
2.1 研究对象纳入情况 本研究纳入62例，其中男性患者45例，女性患者17例，平均年龄(64.24±10.27)岁。脾脏体积指标缺如者5人，其中轻度组3人，中重度组2人。实验室指标缺如者0人。
2.2 一般临床资料比较 轻度组与中重度组AIS患者年龄、性别、入院收缩压、舒张压、危险因素(吸烟史、饮酒史、糖尿病史、房颤史)、白细胞绝对值、中性粒细胞绝对值、单核细胞绝对值及淋巴细胞绝对值之间相比较，差异均无统计学意(P>0.05)(见表1)。
2.3 轻度组与中重度组血清炎性因子及脾脏体积变化比较 轻度组与中重度组AIS患者IL-2、IL-10、IL-4、IFN-α、IFN-γ、发病24 h内脾脏体积及发病48 h脾脏体积水平，差异均无统计学意义(P>0.05)。与轻度组比较，中重度组的IL-5、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-17及TNF-α、IL-12P70及脾脏体积标准化差值水平均增加，差异均有统计学意义(P<0.05)(见表2、表3)。
2.4 ROC曲线分析脾脏体积标准化差值及血清炎性因子对AIS严重程度预测价值 IL-8、IL-17、TNF-α、IL-1β及IL-5预测AIS严重程度的曲线下面积(AUC)相较于IL-6、IL-12P70水平及脾脏体积标准化差值预测AIS严重程度的曲线下面积(AUC)小。其中，IL-6预测AIS严重程度的曲线下面积(AUC)为0.715(95%CI0.587～0.842，P=0.004)，敏感度为53.1%，特异度86.7%，最佳界值为5.859 pg/ml；
IL-12P70预测AIS严重程度的曲线下面积(AUC)为0.715(95%CI0.585～0.845，P=0.004)，敏感度为71.9%，特异度70.0%，最佳界值为0.650 pg/ml；
脾脏体积标准化差值预测AIS严重程度的曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI0.710～0.942，P<0.001)，敏感度为90.0%，特异度74.1%，最佳界值为0.056 cm3(见表4、图2、图3)。
表1 轻度组与中重度组一般临床资料比较
表2 轻度组与中重度组血清炎性因子水平比较[M(Q1,Q3)]
表3 轻度组与中重度组脾脏体积变化的比较
表4 脾脏体积标准化差值及血清炎性因子对AIS严重程度预测的ROC曲线分析
图2 IL-6、IL-12P70的ROC曲线
图3 发病24 h内脾脏体积与发病48 h脾脏体积标准化差值的ROC曲线
AIS作为一类高致残率、高致死率的疾病，在临床实践中，准确评估 AIS 的病情有助于风险分层及病情恶化的预测[7]。目前头部CT及MR虽是诊断及判定其严重程度的重要技术手段[8,9]，但也存在不足。例如，头部CT在患者发病24 h内常不能发现病灶、MR检查价格昂贵，且对于体内有金属物品的患者无法完成该项检查[10]。因此，探索简单易行的生物指标及影像学检查对AIS严重程度进行评估，在临床实践中具有重要的价值。
血清炎性因子是免疫系统的重要组成部分，其释放后激活后续细胞因子和受体，在其他细胞中级联表达或建立反馈回路[11]。血清炎性因子根据其免疫功能不同，分为促炎因子和抗炎因子，其在脑梗死中发挥着重要作用，其中IL-6作为一种血清炎性因子，Su等研究表明：缺血缺氧、氧化应激、血管闭塞和炎症可引起的IL-6升高，在一定程度上导致肝脏产生急性期蛋白，从而刺激白细胞聚集和血栓形成，导致心脑血管疾病发生[12,13]。
此外，IL-6水平与卒中严重程度、临床预后和脑损伤程度相关[2]。对IL-12P70而言，它是由IL-12由两个共价连接的亚基IL-12p35和IL-12p40共同表达，形成具有生物活性的血清炎性因子[14]。IL-12可能通过激活免疫反应细胞及调节炎症反应，使缺血性脑损伤的病情恶化。此外，部分研究表明，IL-12p70对缺血性脑卒中存在不利影响[12,15]。
脾脏作为免疫细胞的主要贮存器，它主要通过将免疫细胞及免疫因子释放到血液循环中，对感染和损伤产生相应的应答(包括对中枢神经系统的损伤)，且脾脏参与卒中事件后可能会导致更坏的结果[3,16]。Preeti等人指出缺血性脑卒中患者的脾脏体积在卒中后6 h内开始缩小，卒中后脾脏萎缩持续约3 d，第4天到第8天脾脏体积逐渐增加直至恢复到卒中前状态，且临床预后良好的患者，即NIHSS评分下降的患者，在入院期间脾脏体积缩小后增加。相反脾脏体积继续缩小的患者，临床结局较差[4]。此外，有文献指出对发病24 h内、2 d、3 d 和5 d 4个时间点的脑卒中患者脾脏体积进行检测，发病2 d的脾脏体积最小[17]，且以往动物实验也发现小鼠大脑中动脉栓塞后24 h、48 h及52 h脾脏显著缩小[18]。
综上所述，本研究中IL-5、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-12P70、IL-17及TNF-α水平与AIS的严重程度均有相关性；
在中重度组中，IL-5、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-12P70、IL-17及TNF-α水平均较轻度组升高；
IL-6及IL-12P70水平相较于IL-8、IL-17、TNF-α、IL-1β及IL-5水平而言，对AIS严重程度的预测价值更高，且IL-6具有较高的特异度。此外，本研究选取AIS发病24 h内及48 h脾脏体积作为研究对象，并计算其标准化差值作为AIS严重程度作为预测因子。结果发现中重度组的脾脏体积标准化差值高于轻度组，且其对AIS严重程度的预测价值及敏感度均优于血清炎性因子。本研究的不足和局限性在于：
第一，研究群体容易受到选择偏倚的影响；
第二，本研究样本量较小，且属于单中心回顾性研究，故需进一步进行大样本多中心的临床随机对照研究来提供更多的证据。
