儿童门静脉海绵样变性脾静脉中NFκB、VEGF的表达及意义:切脾后门静脉海绵样变

时间：2019-04-04 03:17:07　来源：雅意学习网本文已影响人

　　【摘要】目的研究门静脉海绵样变性患者脾静脉NFκB、VEGF的表达，以探讨门静脉海绵样变性巨脾的形成机制。方法取7例门静脉海绵样变性患者脾静脉石蜡切片作为实验组，8例车祸伤脾脏挫裂伤脾静脉石蜡切片作为对照组，通过免疫组化测定NFκB、VEGF的表达，t检验检验两者差异有统计学意义。结果实验组脾静脉NFκB、VEGF阳性颗粒明显多于对照组，半定量测定实验组的表达量高于对照组，两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论门静脉海绵样变性血管病变及巨脾形成可能与NFκB、VEGF有关。
　　【关键词】门静脉海绵样变性；核转录因子κB；血管内皮生长因子；脾静脉
　　The expression and significance of NFκB and VEGF in the splenic vein of cavernous transformation of portal vein of childrens MAO Jianxiong, LIU Lei,WANG Bin, et al.Department of General Surgery,Shenzhen City Childrens Hospital,Shenzhen 518026，China
　　【Abstract】 Objective To research portal vein cavernous transformation of splenic vein in patients with NFκB, VEGF expression, to explore the forming mechanism of portal vein cavernous transformation of splenomegaly. Methods 7 cases of portal vein degeneration in patients with splenic vein paraffin sections as an experimental group, eight cases of traffic accident in the spleen contusion and laceration of the splenic vein paraffin sections as a control group, the determination of NFκB, VEGF expression by immunohistochemistry, the ttest test significant difference between the two.省略门静脉海绵样变性(cavernous transfromation of portal vein,CTPV)是儿童比较少见的疾病，但近年来随着影像学诊断技术的进步，诊断率逐渐提高。门静脉海绵样变性患儿肝功能多无异常，主要表现为肝前性门静脉高压，消化道出血是其主要的症状及死亡原因，脾脏增大及脾功能亢进是本病的特征之一。本研究通过测定患者脾脏中NFKB及VEGF的表达探讨CTPV患者脾脏增大的机制。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料取2000年2月至2007年3月期间确诊门静脉海绵样变性并行分流术患者脾静脉石蜡切片7例作为实验组；对照组取车祸伤脾挫裂伤行脾切除患者脾静脉石蜡切片8例，脾切除前无脾脏方面的病变。
　　1.2 实验试剂兔多抗 NFκBp65 抗体，鼠单抗 VEGF(IgG)抗体，兔超敏二步法免疫组化试剂盒，鼠超敏二步法免疫组化试剂盒，浓缩型DAB试剂盒, 均购自北京中杉金桥公司。
　　1.3 实验仪器石蜡切片机 LEICA RM 2135(Leica 公司)，显微镜 DMLB30(Leica 公司)，显微镜成像系统(高通公司)，隔水式恒温培养箱 GNP9160(上海精宏实验设备有限公司)，电子干燥箱 LG050B，APES 载玻片(北京中杉金桥公司)，微波炉(Panasonic)。
　　1.4 实验方法
　　1.4.1 免疫组化步骤石蜡切片脱蜡至水，PBS冲洗，浸泡于含3%H2O2去离子水10 min，将切片放入枸橼酸盐缓冲液中，微波炉内加热，使容器内液体温度达到在92℃～98℃之间并维持10～15 min。取出容器，室温中冷却10～20 min。PBS冲洗，滴加VEGF (或NFκBp651:100) 一抗抗体，于湿盒内4℃过夜孵育。PBS冲洗，分别滴加试剂1，室温孵育20 min，PBS冲洗，滴加试剂2，室温孵育20 min，PBS冲洗，用DAB显色，显微镜下控制显色时间，自来水冲洗终止显色，苏木素复染，约2 min，自来水充分洗涤，浸于1%盐酸酒精分化，自来水充分洗涤。70%、80%、90%酒精脱水;无水酒精I、无水酒精Ⅱ脱水。二甲苯I、二甲苯Ⅱ透明，中性树胶封片。
　　1.4.2 NFκB及VEGF结果判定于400倍高倍光镜下进行判定， NFκB阳性颗粒位于细胞核或细胞浆，为棕黄色染色，VEGF阳性颗粒位于细胞浆，为棕黄色染色。
　　NFkappa Bp65表达的测定：由于NFКB活化后进入细胞核，因此单纯测量胞浆或胞核光密度不能完全代表NFКB的活性，因此我们采取核浆光密度比值代表NFКB的表达。每张切片随机取100个细胞，用 Image Pro Plus 6.0 医学图像分析软件对每个细胞的细胞核与细胞浆光密度值(OD)进行分析，计算核浆光密度比值，取均值来表示激活的NFκB的相对表达量［1］。
　　VEGF表达的测定：用 Image Pro Plus 6.0 医学图像分析软件分别检测每张切片的5个视野中阳性染色部位的积分光密度(IOD) 值，及测量区域的面积(取出血管腔面积)，计算出平均光密度(mean density),并取平均值来表示VEGF的相对表达量。
　　1.5 统计学方法用SPSS V 17.0 对数据进行统计，结果以x±s表示，两组间比较用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

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