HPLC法测定二丁片中秦皮乙素的含量:含量测定
时间：2019-05-06 03:26:34 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定二丁片里紫花地丁中秦皮乙素的含量的方法。方法 采用高效液相色谱法对二丁片中的主要有效成分秦皮乙素进行含量测定。紫花地丁为处方中君药，而秦皮乙素为其主要有效成分和特征成分，故选择秦皮乙素为本实验的测定成分。通过紫外扫描选择检测波长，并通过实验确定分析柱以及流动相。通过用不同的溶媒以及不同的提取时间做实验以确定最佳溶媒与提取时间。做标准曲线与线性范围实验，精密度实验，重复性实验，稳定性试验，加样回收率实验以确保秦皮乙素含量测定的准确性。结果 通过实验得出色谱条件：检测波长为353nm；分析柱为KromasilC18色谱柱（5μm，150×4.6mm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（20：80：0.40），流速为1.0ml/min，柱温30℃。理论板数按秦皮乙素峰计算应不低于3000。供试品溶液的制备：以甲醇为提取溶剂，提取时间为30分钟。对照品溶液的制备：用甲醇直接溶解制成每1ml含20μg的溶液。秦皮乙素进样量在0.0214-0.2996μg范围内与峰面积呈很好的线性关系，相关系数r=0.9999，平均回收率为100.98%（n=5），RSD=1.79%。且精密度，重复性，稳定性良好。结论 本法操作简便，结果准确，重现性好，可作为二丁片中秦皮乙素的含量测定方法，故本法可用于二丁片的质量控制。
【关键词】 二丁片；紫花地丁；秦皮乙素；HPLC；含量测定
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.1.1 实验试剂 甲醇为色谱纯(Fisher Chemicals)，水为重蒸馏水。其余试剂为分析纯，对照品∶秦皮乙素（740-200104，供含量测定用），中国药品生物制品检定所提供。
1.1.2 试验用药品 共12批，批号为120102、021201、030201、030202、030203、030801、030802、030803、031001、050201、050202、050203。
1.2 实验仪器 岛津LC-2010A液相色谱仪。SPD-M10Avp二极管阵列检测器。Class-VP色谱工作站；sartoriμsBP211D电子天平（感量0.1mg；0.01mg。载量210g；80g）；aμtoscienceAS5150A超声波清洗器；TGL-16G高速离心机。2 实验结果
由于该方提取工艺中，紫花地丁已提取至浸膏状，故供试品溶液的制备采用超声处理即可，试验对提取溶剂、提取时间进行了考察：
2.1 提取溶剂的考察 因秦皮乙素溶于甲醇、乙醇等溶剂，实验采用以下溶剂试验，结果，见表1。
表1 提取溶剂考察结果
提取溶剂 乙醇 甲醇 40%甲醇 80%甲醇
秦皮乙素含量（mg/g） 1.65 1.71 1.39 1.46
由上表可见，在各浓度甲醇中，以甲醇为溶剂，秦皮乙素的含量最高，故采用甲醇作为提取溶剂。
2.2 提取时间的考察，见表2。
表2 提取溶剂考察结果
提取时间（分钟） 15 30 45
秦皮乙素含量（mg/g） 1.31 1.72 1.75
由表2可见，超声处理30分钟后含量几无变化，试验选择提取时间为30分钟。
2.3 标准曲线与线性范围，见表3。
表3 秦皮乙素对照品标准曲线测定结果
对照品进
样量(μg) 0.0214 0.0428 0.0856 0.1712 0.2568 0.2996
峰面积 70269 147029 289223 559699 833262 961627
秦皮乙素进样量在0.0214-0.2996μg范围内与峰面积呈很好的线性关系，回归方程及相关系数∶Y=0.9300×104+3.1973×106X，r=0.9999(X为秦皮乙素进样量，单位μg，Y为峰面积)；以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积（A）为纵坐标（Y）绘制标准曲线。
2.4 稳定性试验 取批号为02101的样品与秦皮乙素对照品适量，按质量标准正文含量测定项下秦皮乙素的测定方法分别制备供试品溶液与对照品溶液，室温下保存，于制备完成后放置不同时间后，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，按正文测定条件进行测定，记录色谱图，考察其稳定性，结果，见表4。如表所示，供试品溶液及对照品溶液在配制后16小时内测定，结果稳定。
表4 稳定性试验结果
放置时间(H) 0 2 4 8 16 RSD(%)
供试品溶
液峰面积 339036 339602 340149 340313 339252 0.16
对照品溶
液峰面积 701847 700083 700006 700597 701475 0.12
2.5 重复性试验 取批号为02101样品，共5份，精密称定0.5g，按样品分析方法进行测定，结果，见表5。如表所示，含量平均值为1.77mg/g，RSD=1.09%，重复性良好。
表5 重复性试验结果
编号 1 2 3 4 5
取样量(g) 0.1506 0.1489 0.1495 0.1502 0.1511
峰面积 348278 353111 348454 350382 351619
含量(mg/g) 1.75 1.80 1.76 1.77 1.76
平均值(mg/g) 1.77
RSD(%) 1.09
2.6 样品测定 按照质量标准正文含量测定项下秦皮乙素测定方法对十批样品的秦皮乙素含量进行了测定，每批平行测定2次，结果，见表6。
表6 样品中秦皮乙素含量测定结果
样品批号 测定结果(mg/g)
1 2
平均(mg/g)平均(mg/片)
030201 1.72 1.70 1.71 0.91
030202 1.68 1.68 1.68 0.89
030203 1.72 1.73 1.73 0.92
030801 1.70 1.70 1.70 0.90
030802 1.78 1.72 1.75 0.93
030803 1.71 1.75 1.73 0.92
031001 1.82 1.77 1.80 0.95
050201 1.88 1.86 1.87 0.99
050202 1.89 1.89 1.89 1.00
050203 1.91 1.90 1.91 1.01
2.7 含量限度的确定 由表6可见，十批产品秦皮乙素含量为1.68-1.91mg/g（相当于0.89-1.01mg/片），平均为1.78mg/g（相当于0.94mg/片），考虑到本品含量随原料含量有一定波动，并考虑大生产实际下浮20%，暂定本品含秦皮乙素不得少于1.42mg/g（相当于0.75mg/片），待以后在研究中积累数据再作进一步调整。3 结 论
本实验研究结果表明，用高效液相色谱法测定二丁片中秦皮乙素的含量，操作简便，结果准确，重现性好，可作为二丁片质量标准中的含量测定项。
参考文献
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［4］ 季申，王柯.HPLC法测定秦皮甲索，秦皮乙素的含量.中成药，1997，19(10)：40-41.
