尿液结核分枝杆菌检测对肾结核的诊断价值|结核分枝杆菌阳性
时间：2020-03-16 08:25:06 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 探讨尿液结核分枝杆菌检测在肾结核诊断中的应用价值。方法 对54例已确诊为肾结核的患者尿液标本分别采取抗酸菌涂片染色、改良罗氏培养、荧光定量PCR三种方法进行检测，其结果进行分析。结果 抗酸菌涂片染色、改良罗氏培养、荧光定量PCR检测尿液中结核分枝杆菌的阳性率分别为25.9%、51.9%、72.2%。结论 尿液结核分枝杆菌检测属病原学检测，特异性好、操作简便，对肾结核的诊断有着重要的应用价值。
[关键词] 尿液； 结核分枝杆菌； 肾结核； 诊断
[中图分类号] R527.1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-0515（2011）-12-362-01
结核病是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一[1]。近年来，随着结核病发病率在全球范围内的回升，肾结核的发病率也明显增加。据统计，全球每年有近千万人感染结核病，而肾结核约占其中的8%-20%[2]。该病进展隐蔽，发现时，肾功能已部分或完全丧失，患者早期诊断困难，以致延误治疗，对人们的身体健康危害极大。因此早诊断对治疗尤为重要。在众多辅助检查中，除病理诊断外，实验室病原学检查具有较高的特异性，且操作简便，患者无痛苦。现就最常用的抗酸菌涂片染色、改良罗氏培养、荧光定量PCR三种检测方法进行分析，评价其在尿液结核分枝杆菌检测对肾结核诊断的应用价值。
1 材料与方法
1.1 标本来源 2006年11月至2009年10月我院住院的肾结核患者，共计54例。男性29例，女性25例。其中小于20岁者5例，大于40岁者12例，20-40岁者37例，占68.5%；单侧肾结核48例，双侧肾结核6例；合并其他脏器结核病(如肺结核、脊柱结核、肠结核、附睾结核等)39例，约占72.2%。
1.2 标本收集 抗酸菌涂片染色检测：留取12小时尿液，静置，倾去上清液，留取沉淀部分30ml，以3,000rpm离心30分钟，弃上清，取沉淀物涂片。
改良罗氏培养和荧光定量PCR检测：嘱患者留取晨尿，因晨尿浓缩，适用于做病原学检查。在留取尿液之前先用消毒液清洗外阴，以去除污染菌。分别留取中段尿约20ml-30ml于一次性无菌塑料标本杯中各一杯。为提高检出率，所有患者均连续留取3天标本，置于2℃-8℃冰箱中贮存，于3天后将尿液混合进行改良罗氏培养和荧光定量PCR检测。
如患者正在进行抗结核药物治疗时，应停用所有抗结核药一周，以提高结核杆菌的检出率。
1.3 试剂与仪器
1.3.1 抗酸菌涂片染色 试剂按照《全国临床检验操作规程》(第三版)(796)标准自行配置。无需特殊仪器。
1.3.2 改良罗氏培养 试剂罗氏培养基由珠海贝索生物技术有限公司提供。仪器隔水式培养箱由天津市泰斯特仪器有限公司提供。
1.3.3 荧光定量PCR 试剂荧光定量PCR检测试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。仪器LightCycler3.5全自动荧光定量基因扩增仪由罗氏公司提供。
1.4 方法
1.4.1 抗酸菌涂片染色 按照《全国临床检验操作规程》(第三版)(795-796)标准执行操作。
1.4.2 改良罗氏培养 将标本进行离心，以每分钟2000rpm离心3分钟为宜，取离心沉淀后的尿沉渣标本0.1ml-0.3ml，以无菌操作接种于培养基斜面上，一般每份标本同时接种2支培养管。将接种好的培养管置于35℃-37℃培养箱中孵育，5%-10%的CO2可以促进分枝杆菌的生长，培养管须松盖倾斜放置24小时后再将盖子锁紧，垂直放置。接种并孵育第3、7天各观察一次菌落生长情况。此后每周观察一次，记录菌落生长及污染情况。
1.4.3 荧光定量PCR 取底部尿液标本10ml至1.5ml离心管中15,000rpm离心5分钟。去上清，沉淀加无菌生理盐水1ml打匀，15,000rpm离心5分钟，去上清。加50μlDNA提取液充分混匀，100℃浴温10分钟，待自然冷却后，10,000rpm离心5分钟，取上清液2μl加入专用毛细管中4,000rpm离心3分钟，插入圆形卡盘倒置20秒钟后放入仪器中进行循环扩增。步骤为：93℃→2分钟预变性，然后按照93℃5秒→57℃45秒，做40个循环，最后置37℃延伸1秒。整个过程严格执行无菌操作，扩增及结果判读，由电脑自动完成。
2 结果 三种方法检测尿液结核分枝杆菌的阳性检出率分别为抗酸菌涂片染色法25.9%(14/54)，改良罗氏培养法51.9%(28/54)，荧光定量PCR法72.2%(39/54)。
3 讨论 近年来临床不典型肾结核发病率有增加的趋势[3]，不典型肾结核的体征性表现为：①中青年患者反复出现无症状性血尿；②无明确原因的顽固性尿频；③反复脓尿而一般抗感染治疗无效；④轻微的腰痛而不伴有膀胱刺激症状，IVU(静脉尿路造影)显示不明原因的一侧输尿管下端梗阻；⑤或者根本没有任何自觉症状只是偶尔体检时发现一侧肾脏不显影。典型肾结核的特征为进行性加重的慢性膀胱炎症状，即逐渐加重之尿频、尿痛和血尿三大症状[4]。而此时尿中可能查出结核杆菌，只有定期查尿才能早期发现。本组中有5例属于此种情况，应引起重视。此外，近1/2的肾结核患者伴有全身其他部位的结核菌感染，所以发现全身其他部位的结核病灶应进一步检查是否存在肾结核，而全身其他部位的结核病灶也支持肾结核的诊断。
在肾结核的诊断方法中，主要为影像学检查和病原学检查。影像学检查中，B超检查对早期肾结核的诊断意义不大，只适合肾结核初筛和治疗后的复查[5]。IVU或CT的典型表现对中晚期肾结核具有确诊价值[6]。因此，病原学检查对肾结核的早期诊断尤为重要。
抗酸菌涂片染色检查是全世界结核病实验室都在使用的最基本的细菌学检查方法。其优点是简便、快速和廉价，1-2小时即可回报结果，对结核病早期诊断起着重要作用；缺点是灵敏度低，通常需5000-10000条菌/ml才能得到阳性结果。
改良罗氏培养法的优点是灵敏度高于涂片法，特异性好，并可鉴定死菌与活菌，还可以进一步药物敏感性的鉴定，被誉为结核病诊断的“黄金标准”；缺点是用时太长，通常需6-8周才能获得结果。
荧光定量PCR是一种密闭的扩增检测系统，所检测的是结核分枝杆菌的特异DNA片段，具有敏感度、特异度高及方便快速、自动化程度高等优点，特别是对难以培养与生长缓慢的结核杆菌的检测更有优势[7]。阳性下限仅为10个拷贝/ml，操作简单，只需2-3小时即可完成。但也有假阳性和假阴性结果。因此联合多项实验室检查可以提高肾结核诊断的敏感性。
综上所述，尿液结核分枝杆菌的检测是诊断肾结核的关键，且尿标本简单易取，取样不会给患者带来痛苦和增加感染机会，特异性好，灵敏度较高，对肾结核的早期诊断有明显的优势。因此，不难看出尿液结核分枝杆菌检查对临床肾结核以致泌尿系结核的诊断具有无可替代的重要作用。
虽然尿液结核分枝杆菌检测对肾结核的诊断发挥着相当重要的作用，但其检测方法的的灵敏度和特异性还有待进一步提高，且易出现假阴性和假阳性。因此，完整的肾结核诊断仍然需要将病史、临床表现、实验室检测、影像学分析、病理学诊断等方法相结合进行综合分析，才能提高肾结核早期诊断率，为进一步的正规抗结核治疗赢得时机。
参考文献
[1] 卫生部殷大奎副部长在2001年“3.24”世界防治结核病日专家座谈会上的讲话[J].中国防痨杂志,2001,23(4):207.
[2] 刘卓伟,丘少鹏.72例不典型肾结核的诊治[J].新医学,2002,8(33):461-462.
[3] 石莺,黄建军.45例肾结核临床病理分析[J].现代医药卫生,2005,2(21):133-135.
[4] 蒋方,江鉴平,金能成等.晚期肾结核的诊断分析[J].安徽医药,2006,10(2):132-133.
[5] 李邦国,戴辉,蔡争等.肾盂造影、CT对肾结核的诊断价值[J].医学理论与实践,2005,18(1):132-133.
[6] 裴林惠,丁建国.肾结核的CT诊断[J].中国基层医药,2006,11(1):32-33.
[7] 彭丽,罗永艾.结核病的实验室快速诊断[J].新医学,2005,36(1):359-361.
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