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    环境压力对益生菌冲剂活性的影响

    时间:2022-12-05 11:40:04 来源:雅意学习网 本文已影响 雅意学习网手机站

    莫景康,黎绍基

    (广州工商学院,广东广州 510000)

    益生菌是指寄生在人体内,与人体形成共生关系并对人体健康有利的微生物。常见的益生菌有乳杆菌、双歧杆菌、芽孢杆菌以及球菌等[1]。益生菌能在宿主肠道内定植并产生乳酸、细菌素和过氧化氢等物质,抑制肠道内的有害微生物,促进宿主肠道健康。目前,它们被广泛应用于食品和医药领域[2-3]。

    益生菌在食品生产过程中和进入消化道后都可能经历各种环境压力,因此良好的环境压力耐受性对益生菌至关重要。靳志强等[4]采用MRS培养基模拟胃酸环境以及胆盐环境,分离提取出一种可以承受pH=3的环境以及胆盐浓度为0.3%的环境的植物乳杆菌。李利等[5]从酸奶中分离出的2株乳杆菌具有优良的抗酸性以及抗胆盐能力。李一娟等[6]发现从健康家禽新鲜粪便中分离出来的罗伊氏乳杆菌在经过 pH=2.5、1.5 g·L-1胆盐以及 1 mmol·L-1H2O2接种处理6 h后,活菌数基本能维持初始浓度。

    为了解市面上的益生菌冲剂所含的益生菌在不同环境压力下的活性,本研究以市场上在售的3种益生菌冲剂产品为研究对象,检验其中的益生菌对酸、胆盐以及抗氧化性压力的耐受性。

    1.1 材料与试剂

    将有效期内的3种益生菌冲剂产品(表1)接种于MRS液体培养基中,于37 ℃培养活化,每24 h传代。实验时将OD在0.5~1.0的3种细菌培养液在4 000 r·min-1离心10 min,离心后去掉上清液,用生理盐水悬浮,重复以上离心、悬浮、离心,然后将菌体悬浮于新鲜的MRS液体培养基中,使OD≈1.0待用。

    表1 实验用益生菌冲剂信息

    MRS固体培养基和猪胆盐购自北京奥博星生物技术有限公司,过氧化氢溶液购自厦门安永博科技有限公司,MRS液体培养基购自杭州百思生物技术有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 对环境压力条件筛选

    借鉴袁琨等[7]实验方法,将OD≈1.0的3种产品的益生菌用胆盐、酸和过氧化氢处理,具体浓度如下,每个处理重复3次。A:胆盐浓度0%、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%(w/v);
    B:pH值为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和6.5;
    C:H2O2浓度0%、0.003 3%、0.006 7%、0.010 0%、0.0133%(v/v);
    37 ℃恒温培养12 h,测量3种益生菌产品在600 nm的OD值。

    1.2.2 环境压力耐受能力测定

    借鉴袁琨等[7]实验方法,将OD=0.5~1.0的3种产品培养液按上述方法清洗并悬浮于MRS中,使OD≈1.0,立刻对菌液进行以下4种处理,每个处理重复3次。A:0.3%胆盐作为胆盐压力;
    B:pH值为2作为酸性压力;
    C:0.01% H2O2作为氧化压力;
    D:无压力的对照。菌液在37 ℃培养,在第4 h、8 h、12 h、24 h和48 h测OD。以时间为横坐标,以OD为纵坐标作各压力组和对照组的生长曲线。

    2.1 无环境压力下生长情况

    由图1知,在无压力环境中,A、C产品益生菌在24 h时菌落达到稳定期并持续到48 h。而B产品益生菌在24 h时正处于稳定期,在48 h时进入衰亡期。

    图1 3种益生菌冲剂内所含益生菌在无环境压力下的生长情况

    2.2 耐胆盐能力

    在12 h内,3种产品对不同胆盐浓度的适应能力都较强,在0.4%胆盐浓度下3种产品都能成功繁殖生长。其中在0.1%胆盐浓度下A、C产品益生菌耐受能力优于无胆盐对照组,在0.4%胆盐浓度下B产品益生菌耐受能力优于无胆盐组(图2)。依据此结果,选取0.3%胆盐浓度用于动态活性研究。

    图2 3种益生菌冲剂内所含益生菌在不同胆盐浓度的活性

    3种产品在0.3%胆盐浓度下培养48 h的动态活性如图3所示。3种产品在4 h测定时菌落总数已经达到顶峰,往后开始进入衰亡期。与无压力对照组相比可以看出,0.3%浓度胆盐对3种产品的菌株都具有较强的促进生长能力。

    图3 胆盐浓度为0.3%时3种益生菌冲剂内所含益生菌的生长情况

    2.3 耐酸能力

    在pH值为1.5~3.0培养12 h时,3种产品的益生菌均处于抑制状态,而在pH值为3.5时A、C产品益生菌能进行少量繁殖且C产品益生菌比A产品益生菌繁殖稍强,而B产品益生菌仍被抑制,无法繁殖。说明A、C产品益生菌的耐酸能力比B产品好(图4)。依据此结果,选取pH=2.0用于动态活性研究。

    图4 3种益生菌产品内所含益生菌在不同pH值下的实验结果

    在pH值为2.0下,在培养的48 h内,A、B产品益生菌被全程抑制,C产品益生菌能进行少量繁殖。说明在胃酸强度的pH下(pH=2.0),3种产品益生菌的耐受能力一般(图5)。

    图5 pH=2.0时3种益生菌冲剂所含益生菌的生长情况

    2.4 抗氧化能力

    在H2O2浓度为0.003 3%时培养12 h,对3种产品的益生菌抑制作用不明显,H2O2浓度高于0.006 7%时,3种产品益生菌生长受限。可以说明3种益生菌具有一定的抗氧化能力(图6)。依据此结果,选取0.010 0% H2O2浓度用于动态活性研究。

    图6 3种益生菌冲剂所含益生菌在不同H2O2浓度下的生长情况

    在0.010 0% H2O2中的动态生长情况如图7所示。3种益生菌冲剂所含益生菌在0.010 0%固定浓度的H2O2中培养48 h,A、B产品的益生菌全程被抑制,无生长。而C产品益生菌在48 h监测时,发现成功繁殖并达到最高菌落浓度。

    图7 3种益生菌冲剂所含益生菌在0.010 0% H2O2中的生长情况

    3种益生菌产品在胆盐浓度为0.1%、0.2%、0.3%和0.4%下均能保持活性,且A和C产品在0.1%的浓度下出现益生菌生长速度超过无压力对照组的情况,说明低浓度胆盐能促进部分益生菌产品的生长繁殖。在pH值低于3.5时,3种产品的益生菌生长活性受限,无法大量繁殖,说明3种益生菌产品耐酸性一般。使用低浓度的H2O2处理后,发现3种益生菌在低浓度的H2O2(0.003 3%)浓度下能进行生长繁殖,可以说明3种益生菌产品都有一定的抗氧化性能。如何提高产品益生菌的耐消化活性,是各个厂家研发人员需要重点解决的问题。对益生菌冲剂产品的探究,能为市场监管部门提供数据支撑,帮助研发人员更好地开发该类产品。

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