双黄消炎片_HPLC法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量
时间：2019-05-15 03:21:52 来源：雅意学习网 本文已影响 人 
【摘 要】目的：建立双黄消炎片中盐酸小檗碱含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（250mm×4.6 mm，5μm），乙腈―0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH3.0）（27:73）为流动相检测波长为265nm，进样量为10μl。结果：盐酸小檗碱在1.5～30μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9993，盐酸小檗碱平均回收率为98.28%，RSD =1.74%（n=5）。结论：本方法可靠性高，准确性和重复性好，适用于双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量测定。
【关键词】盐酸小檗碱；高效液相色谱法；双黄消炎片
【中途分类号】R286.0 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455（2012）01-0035-03
双黄消炎片收载于卫生部部颁标准第二册65页，由三棵针、黄芩二味药经提取加工精制而成的片剂，具有消炎的功效，用于咽喉疼、腹泄、痢疾、慢性痢疾。原标准仅有黄芩显微鉴别，操作繁琐且专属性不太强，三棵针主要有效成分之一为小檗碱[1]，具有抗菌消炎的作用，因此，选择测定盐酸小檗碱[2]含量作为质量控制指标。我们采用HPLC-UV法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量。结果表明，本文方法快速简便，分离度高，干扰少，并具良好的重复性，可用于双黄消炎片的质量控制。
1 仪器与试药
LC-10AT-VP型高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-10A-VP紫外可见检测器；N2000色谱工作站； AB265-S电子天平（Mettler Toledo）；HS-10260D超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）。
盐酸小檗碱化学对照品（批号：110713－200208），购于中国药品生物制品检定所；双黄消炎片（批号：071201、071202、071203），广西灵峰药业有限公司提供；乙腈为色谱纯，水为自制双蒸水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（250mm×4.6 mm，5μm），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；用乙腈―0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH3.0）（27:73）[3]为流动相。柱温为25℃；检测波长为265nm。进样量为10μL。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000[4]。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片精密称定，研细，取约0.3g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入盐酸―甲醇（1:100）混合溶液50ml，称定重量，于55℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，超声处理（功率80W，50kHz）45分钟放冷再称定重量，用盐酸―甲醇（1:100）混合溶液补足减失的重量，摇匀、滤过、取续滤液，即得。
2.2.3 阴性样品溶液 按处方比例称取除三颗针之外的黄芩、淀粉，混匀，制成双黄消炎片阴性制剂，再取此阴性制剂按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含三颗针的阴性样品溶液。
2.3 流动相的确定及专属性试验 参考文献《HPLC法测定四季三黄胶囊中盐酸小檗碱的含量》的流动相，用乙腈―0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH3.0）（27:73）为流动相分离效果较好，所以选择乙腈―0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH3.0）（27:73）为流动相。效果显示其他组分对测定无干扰，结果见图1。
2.4 线性关系考察 精密称取盐酸小檗碱对照品7.50mg，置100ml量瓶中，加盐酸―甲醇（1:100）使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（浓度为0.075mg/ml），精密量取上述对照品储备液1、2、5、10、20ml，分别置50ml量瓶中，加盐酸―甲醇（1:100）稀释至刻度，摇匀，按正文拟订的色谱条件分别进样10μl测定。以盐酸小檗碱对照品进样浓度(μg/ml)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，则回归方程为： Y=3.5646×104X-1.3640×104（r=0.99999）结果表明：当进样浓度在1.5～30μg/ml范围内时，盐酸小檗碱进样浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 分别精密吸取2.7821mg?mL-1盐酸小檗碱对照品溶液，反复进样6次。结果盐酸小檗碱峰面积平均值为685425，RSD为1.48%。表明仪器的精密度符合要求。
2.6反复性试验 取同一批样品，按供试品溶液的方法制备6份供试品溶液，依法测定，计算含量及相对标准偏差，结果盐酸小檗碱的平均值为:3.246mg/g，RSD =0.6%。结果表明，本法的重复性较好。
2.7 稳定性试验 取供试品溶液，分别在放置0、4、8、12、24h时，依法测定峰面积，结果盐酸小檗碱峰面积平均值为615425，RSD为0.88%，表明供试品溶液在24h内稳定性好。
2.8 加样回收率测定 精密称取盐酸小檗碱品对照品2.78mg，置10ml量瓶中，加盐酸―甲醇（1:100）混合溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀作为对照品储备液（浓度为0.278mg/ml），精密称取重复性试验项下的双黄消炎片（盐酸小檗碱含量为3.246mg/g）约0.15g，平行取5份样，分别精密加入盐酸小檗碱对照品储备液1ml，按正文拟订的方法提取、测定、计算回收率，结果盐酸小檗碱平均回收率为98.28%，RSD =1.74%（n=5），符合定量分析的要求，详见表1。
2.9 样品测定 按正文拟订的含量测定方法，测定了本品10批样品中的盐酸小檗碱含量，结果见表2。10批样品中含量最高为1.48mg/片，含量最低为0.86mg/片，10样品平均含量为1.09mg/片。考虑到原料来源不同其盐酸小檗碱含量有差异，故其限度按最低值适当下调，故本品暂定为“每片含三棵针以盐酸小檗碱（C20H17NO4?HCl）计，不得少于0.65mg/片”。
3 讨论
研究中曾拟修订本品总生物碱的含量测定方法，但试验结果发现难以解决活性炭对生物碱的吸附问题，故未将总生物碱测定列入本品的质量控制指标。本文采用HPLC-UV法测定灵峰药业研发的双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量，结果表明该方法快速简便、分离度高、干扰少并具良好的重复性，可用于双黄消炎片的质量控制。
参考文献：
[1] 中国药典委员会，黄柏，中华人民共和国药典[S]，一部2005.
[2] 中国药典委员会，黄连上清丸，中华人民共和国药典[S]，一部2005.
[3] 钮旭升,林璐,张贵伍;黄连清心片中盐酸小檗碱的含量测定[J].中国现代应用药学;2003年04期.
[4] 王金香,张玉祥,袁旭江;HPLC法测定四季三黄胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].中药新药与临床药理;2006年04期.
